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随机引物法标记
cDNA 第二条链的合成
单个 dA 的加尾
链置换的 DNA 合成
Bsu DNA 聚合酶,大片段保留了嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus subtilis) DNA 聚合酶 I 的 5´→3´ 聚合酶活性,但是缺失了 5´→3´ 核酸外切酶结构域,该大片段自身缺失 3´→5´ 核酸外切酶活性。
重组的 E. coli 菌株,携带有嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus subtilis)DNA 聚合酶 I 基因(起始于第 297 个密码子,因而缺失了 5´→3´ 核酸外切酶结构域)。
5,000 units/ml。
75℃ 20 分钟。
由于缺乏3 ´ → 5 ´ 核酸外切酶活性,Bsu DNA 聚合酶,大片段不能切除 3´ 未配对的突出末端,因而不适用于生成平齐末端。
25℃ 时 Bsu DNA 聚合酶,大片段 保留 50% 的活性,是同温度下 Klenow 片段(3´→5´ exo–)的两倍。
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