性能简介

Cell Counting Kit-8是用于化学药物等对细胞增殖或毒性实验时进行细胞计数的试剂盒。试剂盒中使用高灵敏度的新型水溶性四唑盐WST-8甲臜染料作为显色底物，与传统的细胞计数试剂盒相比，灵敏度大幅度的提高。WST-8被细胞内的脱氢酶还原产生水溶性的甲臜染料。通过直接测量甲臜染料（450 nm）的吸光度，即可测出活细胞的数量。细胞数量与甲臜染料成正比关系。同时试剂盒为配置好的1瓶溶液，易于使用。

产品特点

1）对比[³H]法，无需放射性同位素。

2）使用水溶性四唑盐与水溶性甲臜染料，因此无需DMSO换液操作步骤。（如MTT分析等需要）

3）与其他水溶性四唑盐法（XTT，MTS）相比，灵敏度更高的同时毒性更低。

4）试剂盒为1瓶装，无需提前配置，无需准备其他试剂。

5）试剂盒稳定性高。

6）试剂可以与酚红同时使用。

原理

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 包含了Dojindo开发的水溶性四唑盐—WST^®-8和电子载体(1-Methoxy PMS)。由于WST^®-8具有高水溶性，它存在于细胞外而不渗透活细胞膜，通过1-Methoxy PMS接受乳酸脱氢酶的辅酶NADH的电子而被还原，生成水溶性WST^®-8甲臜染料（最大吸收波长450nm：详见下方吸收光谱）。

产品概述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 利用了Dojindo开发的水溶性四唑盐—WST^®-8 (2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯 基) -5- (2,4-二磺基苯) -2H-四唑单钠盐)，它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的橙黄色甲臜。 CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中，无需配制。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的 一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。WST^®-8被细胞内脱氢酶氧化还原后生成的橙黄色甲臜能够溶解在培养基中 ，生成的甲臜物的数量与活细胞数量成正比。

操作步骤

本试剂盒测定方法简单，只需一瓶试剂即可操作，无需二次配制工作液，从而提高实验者的效率。

CCK-8使用例

细胞增殖实验(左)与细胞毒性实验(右)

CCK-8与LDH

Cell Counting Kit-8 与Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST同时检测细胞毒性

检测药物： Mitomycin C

细胞: HeLa

培养基: MEM, 10% FBS

孵育条件: 37℃, 5% CO₂, 48小时

检测波长: Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST^® (490 nm)

使用Mitomycin C 检测检测HeLa细胞毒性。通过使用Cell Counting Kit-8和Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST^® [货号: CK12]两种方法检测。Cell Counting Kit-8以细胞活性为指标，Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST以游离的LDH为指标，实验证实两种指标检测存在差异性。二者联用，能更全面的表征细胞毒性。

WST®-8甲臜染料

WST®-8甲臜染料吸光度与续细胞数量的关系

培养基: MEM, 10%FBS(HeLa ) , RPM1640(HL60)

孵育条件:37℃, 5%CO₂, 2hr (HeLa、HL60) 

检测试剂:Cell Counting Kit-8

    (●) 450 nm, XTT (◆) 450 nm, MTS

    (▲) 490 nm, MTT(■) 570 nm 

将HeLa细胞和HL60细胞以不同的细胞数接种到96孔板中，按孵育条件处理后加入以上每种试剂测定吸光度。根据细胞数量增加吸光度。CCK-8灵敏度、线性范围优于以上其他方法。

试剂稳定性比较

Cell Counting Kit-8可冷藏保存1年以上，避免试剂浪费！

试剂毒性评价

试剂本身对细胞毒性的比较

HeLa细胞在96孔板中孵育(5000个/孔)。在CO2培养箱中开始显色反应，每隔3、6、24小时在显微镜下观察细胞形态。Cell Counting Kit-8在24小时后细胞形态没有改变。在使用药物进行细胞毒性试验时，应选择测量试剂本身对细胞毒性影响更小的试剂。