转染级质粒DNA提取柱

图1 阴离子交换树脂柱工作流程图

　　阴离子交换树脂柱可制备超纯的质粒DNA,同两次氯化镍梯度纯化的效果一样,适用于所有下游应用.根据阴离子交换树脂设计的流程,可以获得高纯度质粒DNA.采用重力流设计的纯化柱,和过滤柱同时配套使用,可以提高纯化速度和便捷性.中和后的裂解混合物可以直接倒入带有过滤柱的纯化柱内,这样就实现了裂解混合物澄清和上柱一步完成.

图2 阴离子交换树脂柱工作流程图

产品特征:

●用于纯化P1,BCA,PAC和其它大型构建体的离子交换剂.

●适用于高达300Kbp的构建体.

●过滤器可以温和的过滤裂解液,无需离心,无需剪切大结构体,保证质粒完整性.

●无需额外的费用和步骤即可得到转染级的DNA.

●适用于高低拷贝质粒,低内毒素.

产品技术:

　　纯化流程采用经改良的碱性裂解、中和方法和阴离子交换树脂,使得本产品拥有高产量、高纯度和低内毒素的效果.树脂颗粒规格大小一致并带有小孔,使得其拥有更大的表面积,流速快并且产量高.特殊修饰过的基团分子臂更长且电荷密度更高,使的该阴离子交换树脂非常适用于提取纯化非常大的构建体如P1,BCA和PAC等;阴离子交换树脂对DNA的高选择性和特异性,确保了从各种细胞杂质(如:RNA和内毒素)中获得极佳的分离效果,获得高纯度质粒DNA不含任何种类的RNA、蛋白质、代谢产物、燃料或碳水化合物,纯化产物杂质少可直接用于各种下游应用,包括敏感细胞系的转染、自动测序、体外转录、酶切、PCR、克隆、限制性分析等.

技术参数:

提取柱组成:

图3 30ml提取柱由树脂、重力柱、过滤柱组成

产品应用:

　　主要用于P1、BCA、PCA等大型质粒DNA提取;DNA胶回收、基因组DNA纯化、病毒DNA纯化、还广泛用于质粒DNA纯化.阴离子交换树脂柱技术,操作简单,高回收率,高质量等.由于价格便宜尤其适用于高通量、大量DNA提取和纯化,降低成本.

过滤柱的应用:

●简单快速去除细胞碎片

●无需离心保证质粒完整性

●即使对于大结构体也不会剪切

　　过滤柱特别设计用于替代碱性裂解后的离心步骤,澄清裂解混合物和上柱同时进行,减少操作时间,在无人操作大约2-10分钟可以从样品中分离细胞碎片和十二烷基硫酸钾沉淀.过滤器不会诱导大型DNA结构剪切,如PAC、BAC、P1等,保证质粒DNA完整性.

工作流程：

从培养液中收获的细菌通过使用改良的碱/ SDS方法裂解.染色体和质粒DNA都在这些碱性条件下变性.然后将乙酸钾加入到变性裂解物中,这引起含有染色体DNA和其他细胞化合沉淀物的形成并中和裂解物.保留在溶液中的质粒DNA可以回复到其天然超螺旋结构.用平衡缓冲液平衡提取柱后,将澄清的裂解物加载到柱上,将质粒DNA与阴离子交换树脂结合.在随后的洗涤步骤之后,纯化的质粒DNA在高盐缓冲液中洗脱并用异丙醇沉淀.最后将质粒DNA溶解在TE缓冲液中供进一步使用.

应用数据：

使用阴离子交换树脂柱纯化质粒DNA(Puc119)

从下图中可以看出,该方法产生的DNA不含污染物,如基因组DNA或RNA;高纯度纯度可以用于酶切实验.

1%琼脂糖凝胶(TAE)

1：标准品

2：穿透液

3：第一次洗涤穿透液

4：第二次洗涤穿透液

5：洗脱液

6：用EcoRI/SSoI消化的质粒

纯化不同质粒DNA去除裂解后细胞碎片离心与过滤柱比较

从下图可以看出,过滤柱去除细胞碎片可以达到离心的效果.提取产物条带单一纯度高。

1%琼脂糖凝胶(TAE)

1：标准品

2：2、4、6离心去除沉淀

3：3、5、7过滤器去除沉淀