产品简介

本试剂盒提供了所有的用于cDNA第一链合成的试剂，其中的TIANScriptⅡRTase为改良后的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MLV），改良后的新RTase具有更高的模板亲和力和更低的RNase H活性，因此使其在cDNA第一条链的合成过程中具有通读复杂二级结构模板和反转录长片段cDNA的能力。产品中配备的5×TIANScriptⅡRTase Buffer经过精心的优化，既保证了新型RTase的高效酶活，又拓宽了RNA模板量的加入范围，使得反转录出来的cDNA具有更好的质量以便用于后续的实验分析。

产品特点

■ 酶活效率高：高效的反转录酶活性，后续实验兼容性好。

■ 底物范围广：适用于所有RNA，尤其是具有复杂二级结构的RNA 模板。

■ 反转片段长：cDNA 第一链合成可以达到12 kb。

■ 操作简单：只需一步添加所需成分，无需中间加入任何试剂。

适用范围

1. cDNA第一链的合成；

2. cDNA文库的构建；

3. 一步法RT-PCR；

4. RACE分析。

储存条件

本产品中的各成分可在-20℃条件下保存1年。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1. 用于cDNA合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行滤除菌处理。

2. RNA样品要避免基因组DNA污染；

3. 避免反复冻融RNA，使RNA保持在冰浴中处融化状态；

4. 试剂盒中各组分成分应在-20℃保存；

5. 在使用Random Primer时，要注意随机引物量和总RNA量之间的关系，一般建议50 ng随机引物/5 ug总RNA。当提高Random/RNA的比率将会提高短片段（～500 bp）cDNA的合成；而当降低Random/RNA的比率将会提高长片段cDNA的合成；

6. 如果模板RNA富含二级结构，可以先在65℃条件下处理5min；

7. 如果反转录中使用PCR下游引物，为了防止引物错配导致的非特异扩增，可以在50℃条件下进行反转录；

8. 在进行长片段扩增时，为了防止cDNA结果被破坏，建议以70℃下处理15 min为酶灭活条件；

9. 当使用酶类时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部，由于酶粘度高，吸取时应慢慢吸取。

注意：如果要扩增长片段，需使用新鲜提取所得的完整性好、纯度高的RNA。