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碧云天 pShuttle-CMV-N-Myc(腺病毒质粒)(D8137-1μg)

真核载体

售价¥ 降价通知

市场价¥888
  • 商品货号
    D8137-1μg
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  • 商品名称:碧云天 pShuttle-CMV-N-Myc(腺病毒质粒)(D8137-1μg)
  • 商品编号:D8137-1μg
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2022-08-11
  • 商品毛重:200克
  • 库存: 65535
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D8137-1μg pShuttle-CMV-N-Myc(腺病毒质粒) 1μg 888.00元
D8137-100μg pShuttle-CMV-N-Myc(腺病毒质粒) 100μg 1169.00元

pShuttle-CMV-N-Myc是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端Myc tag(Myc标签)融合蛋白的重组腺病毒包装用的穿梭质粒。本穿梭质粒构建后,需要和预转染了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)以及重组腺病毒包装细胞配合使用才能完成重组腺病毒的包装。

pShuttle-CMV-N-Myc含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码Myc标签的序列,因此可以表达出含有Myc标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。

本质粒为卡那霉素抗性。

重组腺病毒(Recombinant adenoviruses)是一种常见的用于在培养细胞或动物体内表达外源基因的重要工具。重组腺病毒具有感染宿主细胞范围广、感染不依赖细胞分裂、高滴度及目的基因表达水平高等特性。最常用的腺病毒载体是人类血清5型腺病毒。改造后的人类血清5型腺病毒,删除了在病毒装配过程中起关键作用的E1基因和非必须的能表达逃避宿主免疫的E3基因,E1和E3基因的删除使得重组腺病毒不能自我复制,同时给外源基因的插入提供了空间,最长可插入7.5kb的外源基因。从而提高了重组腺病毒的的安全性和可操作性。再利用携带E1基因的AD-293、293A、HEK293等细胞作为包装细胞就可以完成重组腺病毒的包装。

pShuttle系列的穿梭质粒携带外源目的基因,经过Pme I线性化,随后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(D8106)共转染到大肠杆菌BJ5183中,或者转染到已经已经预转染了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)中同源重组。BJ5183菌株表达recET基因,具有很高的基因同源重组(homologous recombination)活性,使带有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1通过末端反向重复序列同源重组,实现外源基因与腺病毒基因组的整合。将重组的携带外源基因的腺病毒质粒用Pac I线性化后转染到AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装。从而制备获得高滴度、自我复制缺陷并且带有目的基因的重组腺病毒。

目的基因引入时不能含有Pme I及Pac I这两个酶切位点,如果含有该两个酶切位点的目的基因,需要对该位点进行突变方可进行基因操作。

pShuttle-CMV-N-Myc质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
left inverted terminal repeat 1–103
encapsidation signal (ES) 183–331
CMV promoter 341–933
Myc tag 955-984
multiple cloning site 986–1034
SV40 polyA 1051–1262
Ad5 right arm homology 1267–3522
Ad5 left arm homology 3570–4452
right inverted terminal repeat 4453–4556
pBR322 origin 4763–5430
kanamycin resistance ORF 6239–7030

pShuttle-CMV-N-Myc质粒的图谱如下:

pShuttle-CMV-N-Myc的多克隆位点的的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D8137 pShuttle-CMV-N-Myc.pdf

pShuttle-CMV-N-Myc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pShuttle-CMV-N-Myc)包括:

Acc65 I Afl II Age I Asc I Asp718
Blp I BsiC I BsiW I BstB I Bsu36 I
Cla I Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Kpn I Nru I Pml I Pvu I Sfi I

pShuttle-CMV-N-Myc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pShuttle-CMV-N-Myc)包括:

BsrGI T`GTAC,A 193 HpaI GTT|AAC 1156
SnaBI TAC|GTA 679 PflMI CCAN,NNN`NTGG 1934
NheI G`CTAG,C 940 BstXI CCAN,NNNN`NTGG 2373
NotI GC`GGCC,GC 945 BbsI GAAGAC 8/12 3175
BamHI G`GATC,C 986 BbvII GAAGAC 7/11 3176
HindIII A`AGCT,T 992 Bst1107I GTA|TAC 3529
EcoRV GAT|ATC 1000 XcaI GTA|TAC 3529
SalI G`TCGA,C 1004 PmeI GTTT|AAAC 3550
MluI A`CGCG,T 1010 EcoRI G`AATT,C 3555
BglII A`GATC,T 1016 AvrII C`CTAG,G 4097
PaeR7I C`TCGA,G 1022 BspHI T`CATG,A 5493
XhoI C`TCGA,G 1022 Psp1406I AA`CG,TT 5892
XbaI T`CTAG,A 1028 RsrII CG`GWC,CG 6898
SpeI A`CTAG,T 1034 DraIII CAC,NNN`GTG 7245
ScaI AGT|ACT 1039 XmnI GAANN|NNTTC 7499

pShuttle-CMV-N-Myc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

forward primer (888-907): 5´GGTCTATATAAGCAGAGCTG3´

Reverse primer (1048-1070): 5´GTGGTATGGCTGATTATGATCAG3´

pShuttle-CMV-N-Myc的全序列信息:pShuttle-CMV-N-Myc.txt

腺病毒包装的具体方法和步骤可以参考如下网页:

https://www.beyotime.com/support/pShuttle.htm

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D8137-1µg pShuttle-CMV-N-Myc 1μg
D8137-100µg pShuttle-CMV-N-Myc 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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