pET-N-His-SUMO3-Avi是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达可被生物素标记的目的蛋白的原核表达质粒。该质粒由T7启动子驱动N端带有His标签(His tag)、SUMO3标签(SUMO3 tag)以及Avi标签(Avi tag)的目的蛋白。在ATP、生物素(Biotin)以及生物素连接酶(Biotin ligase) BirA存在的体外条件下，BirA催化生物素共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上，从而对目的蛋白进行生物素标记。同时，本质粒带有SUMO3标签，可被rSENP2蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现相应标签蛋白与目的蛋白的高效分离。本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。

Avi标签是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签，在ATP和生物素存在的条件下，BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素，从而实现目的蛋白的生物素标记[1]。

生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好；体内或体外均可进行标记，标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高，从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强[1]。

类泛素蛋白修饰分子(Small ubiquitin-like modifier, SUMO)，也被称为泛素样修饰因子小蛋白、泛素样小分子修饰因子或小泛素相关修饰物，是广泛存在于真核生物的蛋白家族。和泛素化(Ubiquitination)类似，类泛素蛋白修饰分子通过类泛素蛋白(Ubiquitin-like proteins, Ubls)活化酶(Ubl activating enzyme, E1)、结合酶(Ubl conjugating enzyme, E2)和连接酶(Ubl protein ligase, E3)共价连接到特定蛋白的赖氨酸上，这一过程被称为SUMO化修饰(SUMOylation)。SUMO化修饰是一种翻译后修饰，参与细胞的调控，如细胞核到细胞膜的运输、转录调控、细胞凋亡、蛋白质的稳定、压力应激和细胞周期的调控等[2]。

SUMO3标签源自人SUMO3基因，在大肠杆菌体系中SUMO3标签可以作为分子伴侣帮助目的蛋白在表达过程中正确折叠，提高目的蛋白的可溶性和表达量。SUMO3标签在体外可以被rSENP2蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现SUMO3标签与目的蛋白的高效分离，切割后的目的蛋白不带有任何相应标签氨基酸的残留，因此SUMO3标签适用于大肠杆菌重组蛋白的表达和纯化[3]。

本质粒表达的目的蛋白可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等进行纯化。

pET-N-His-SUMO3-Avi质粒的主要信息如下：

pET-N-His-SUMO3-Avi质粒(5759bp)的图谱如下：

pET-N-His-SUMO3-Av表达基因的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D3009 pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒).pdf。

pET-N-His-SUMO3-Avi中没有的酶切位点包括：

pET-N-His-SUMO3-Avi中的单酶切位点包括：

pET-N-His-SUMO3-Avi质粒中推荐使用的测序引物序列如下： T7-R (21-39): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'

pET-N-His-SUMO3-Avi的全序列信息：D3009 pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒)全序列.txt

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本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

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