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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D3017-1μg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA(生物素标记原核表达质粒) | 1μg | 888.00元 |
| D3017-100μg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA(生物素标记原核表达质粒) | 100μg | 1169.00元 |
pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达生物素标记蛋白的质粒。该质粒带有两组T7启动子/lac操作子和核糖体结合位点(Ribosome binding site, RBS)，其中一组的多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)前有His标签(His tag)、SUMO3标签(SUMO3 tag)和Avi标签(Avi tag)，另一组用于表达带有S标签(S tag)的生物素连接酶(Biotin ligase) BirA，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白和BirA的共表达。在ATP和生物素(Biotin)存在的条件下，细胞内表达的生物素连接酶BirA催化生物素共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上，从而可以在表达目的蛋白的同时进行生物素标记。同时，本质粒带有SUMO3标签，可被rSENP2蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现相应标签蛋白与目的蛋白的高效分离。本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。
Avi标签是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签，在ATP和生物素存在的条件下，BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素，从而实现目的蛋白的生物素标记[1]。
生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好；体内或体外均可进行标记，标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高，从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强[1]。
类泛素蛋白修饰分子(Small ubiquitin-like modifier, SUMO)，也被称为泛素样修饰因子小蛋白、泛素样小分子修饰因子或小泛素相关修饰物，是广泛存在于真核生物的蛋白家族。和泛素化(Ubiquitination)类似，类泛素蛋白修饰分子通过类泛素蛋白(Ubiquitin-like proteins, Ubls)活化酶(Ubl activating enzyme, E1)、结合酶(Ubl conjugating enzyme, E2)和连接酶(Ubl protein ligase, E3)共价连接到特定蛋白的赖氨酸上，这一过程被称为SUMO化修饰(SUMOylation)。SUMO化修饰是一种翻译后修饰，参与细胞的调控，如细胞核到细胞膜的运输、转录调控、细胞凋亡、蛋白质的稳定、压力应激和细胞周期的调控等[2]。
SUMO3标签源自人SUMO3基因，在大肠杆菌体系中SUMO3标签可以作为分子伴侣帮助目的蛋白在表达过程中正确折叠，提高目的蛋白的可溶性和表达量。SUMO3标签在体外可以被rSENP2蛋白酶特异性的识别并切割，从而实现SUMO3标签与目的蛋白的高效分离，切割后的目的蛋白不带有任何相应标签氨基酸的残留，因此SUMO3标签适用于大肠杆菌重组蛋白的表达和纯化[3]。
本质粒表达的目的蛋白可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)、His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等进行纯化。
pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| T7-1 promoter | 6635-2 |
| His tag | 77-94 |
| SUMO3 tag | 101-376 |
| Avi tag | 380-424 |
| Multiple Cloning Sites | 430-468 |
| T7-2 promoter | 533-551 |
| BirA | 622-1584 |
| S tag | 1597-1641 |
| T7 Terminator | 1693-1740 |
| f1 origin | 1777-2232 |
| Ampicillin | 2347-3207 |
| ori | 3381-3969 |
| lacI | 5162-6244 |
pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA质粒(6651bp)的图谱如下：
pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA表达基因的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D3017 pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA(生物素标记原核表达质粒).pdf。
pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA中没有的酶切位点包括：
| AatII | AbsI | Acc65I | AcvI | AgeI | AhlI | AleI |
| AsiGI | AsiSI | Asp718I | AsuNHI | BaeI | BbrPI | BcuI |
| BglII | BmtI | BoxI | BplI | BshTI | BsiWI | Bsp68I |
| BspOI | BstPAI | BstSNI | BtuMI | Cfr9I | Cfr42I | CpoI |
| CsiI | ICspI | CspA | CspCI | Eco32I | Eco72I | Eco105I |
| EcoRV | EcoT22I | FalI | FseII | FspAI | I-CeuI | I-PpoI |
| I-SceI | KflI | KpnI | KspI | MabI | MauBI | MfeI |
| Mph1103I | MreI | MssI | MunI | NheI | NruI | NsiI |
| OliI | Pfl23II | PI-PspI | PI-SceI | PinAI | PmaCI | PmeI |
| PmlI | PshAI | PspCI | PspLI | PsrI | RgaI | RigI |
| RruI | RsrII | Rsr2I | SacII | SanDI | SexAI | SfaAI |
| SfiI | Sfr303I | SgfI | SgrBI | SgrDI | SmaI | SmiI |
| SnaBI | SpeI | SrfI | SstII | SwaI | TspMI | XmaI |
| XmaCI | ZraI | Zsp2I |
pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA中的单酶切位点包括：
| AflII | A`CRYG,T | 482 | NdeI | CA`TA,TG | 617 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2420 | NotI | GC`GGCC,GC | 469 |
| AvrII | C`CTAG,G | 1664 | PacI | TTA,AT`TAA | 1660 |
| BamHI | G`GATC,C | 374 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1585 |
| BbvCI | CC`TCA,GC | 1102 | PciI | A`CATG,T | 4025 |
| BmgBI | CAC|GTC | 352 | PflFI | GACN`N,NGTC | 4283 |
| BsmI | 828 | PpuMI | RG`GWC,CY | 5020 | |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 4142 | PsiI | A`CATG,T | 2135 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 509 | PspXI | VC`TCGA,GB | 1585 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 6213 | PvuI | CG,AT`CG | 2790 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 5707 | SacI | G,AGCT`C | 441 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 4258 | SalI | G`TCGA,C | 456 |
| Bsu36I | CC`TNA,GG | 1567 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 4142 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 2010 | ScaI | AGT|ACT | 2900 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 439 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 6570 |
| EcoRI | G`AATT,C | 431 | SphI | G,CATG`C | 6422 |
| FspI | TGC|GCA | 2642 | SspI | AAT|ATT | 2215 |
| HindIII | A`AGCT,T | 462 | StuI | AGG|CCT | 233 |
| HpaI | GTT|AAC | 5387 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 4283 |
| MluI | A`CGCG,T | 5889 | XbaI | T`CTAG,A | 30 |
| NcoI | C`CATG,G | 69 | XhoI | C`TCGA,G | 1585 |
pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA质粒中推荐使用的测序引物序列如下： T7-R (533-552): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'
pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA的全序列信息：D3017 pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA(生物素标记原核表达质粒)全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3017-1µg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA | 1µg |
| D3017-100µg | pET-Dual-His-SUMO3-Avi-MCS-BirA | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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