pCMV-C-HA-Hyg是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端带有HA标签(HA Tag)的目的蛋白的表达质粒。质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的3′端含有一个编码HA标签的序列，可以表达含有HA标签的融合蛋白，因此可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白，从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。

pCMV-C-HA-Hyg质粒为氨苄青霉素抗性和潮霉素B (Hygromycin B)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌，而在转染哺乳动物细胞后，可利用其Hygromycin B抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Hygromycin B (ST1389)可以从碧云天购买。

Hygromycin B是来源于吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的一种氨基糖苷类抗生素，可通过中断易位并增加80S核糖体上的错误翻译而抑制蛋白质的合成，从而杀死原核或真核细胞。大肠杆菌来源的Hygromycin B抗性基因(hyg或hph)所编码的Hygromycin B磷酸转移酶可将Hygromycin B磷酸化，导致其失活，从而使细胞对Hygromycin B产生抗性。因此，Hygromycin B可用于筛选成功转染Hygromycin B抗性基因的原核或真核细胞。

Hygromycin B用于细胞筛选的浓度范围是100~1000μg/ml，实际应用时应针对不同的细胞系测试Hygromycin B的浓度梯度，确定最佳使用浓度。

pCMV-C-HA-Hyg质粒(5585bp)的图谱如下：

pCMV-C-HA-Hyg质粒的主要信息如下：

pCMV-C-HA-Hyg的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2781 pCMV-C-HA-Hyg.pdf

pCMV-C-HA-Hyg中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-HA-Hyg)包括：

pCMV-C-HA-Hyg中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-HA-Hyg once)包括：

pCMV-C-HA-Hyg质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：

T3 primer (1654-1672): 5'AATTAACCCTCACTAAAGG 3'

T7 primer (1856-1874): 5'TAATACGACTCACTATAGG 3'

pCMV-C-HA-Hyg的全序列信息:D2781 pCMV-C-HA-Hyg-seq.txt

不同真核表达质粒的比较和选择，以及标签和抗性的考虑可以参考如下网页：

https://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001001001004

-20℃保存。

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。