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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2783-1μg | pCMV-N-Flag-Zeo | 1μg | 888.00元 |
| D2783-100μg | pCMV-N-Flag-Zeo | 100μg | 1169.00元 |
pCMV-N-Flag-Zeo是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有Flag标签(Flag Tag，DYKDDDDK)的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5′端含有一个编码Flag标签的序列，可以表达含有Flag标签的融合蛋白，因此可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，从而有利于目的蛋白的检测和分离纯化。
pCMV-N-Flag-Zeo质粒为氨苄青霉素抗性和Zeocin(博来霉素)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌，而在转染细胞后，可利用其Zeocin抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Zeocin (ST1450)可以从碧云天购买。
Zeocin是来源于轮枝链霉素(Streptomyces verticillus)的一种碱性、水溶性、铜离子螯合的糖肽抗生素。当Zeocin进入细胞后，与其螯合的Cu2+被还原并被细胞内巯基化合物去除，导致Zeocin被活化，嵌入细胞DNA使其断裂，并最终导致细胞死亡。印度链异壁菌(Streptoalloteichus hindustanus)来源的Sh ble基因编码一种14kDa大小的蛋白，能够以化学计量方式结合Zeocin，抑制其DNA双链断裂活性，使细胞对Zeocin产生抗性。因此，Zeocin可用来筛选成功转染携带Sh ble基因质粒的原核或真核细胞。
Zeocin筛选浓度范围为50-1000μg/ml，实际使用时应针对不同的细胞系测试Zeocin的浓度梯度，以确定最佳使用浓度。
pCMV-N-Flag-Zeo质粒(4935bp)的图谱如下：
pCMV-N-Flag-Zeo质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| Ampicillin resistance ORF | 63-923 |
| CMV promoter | 1405-1608 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 1654-1672 |
| Flag tag | 1713-1736 |
| Multiple cloning site (XmaI-ApaI) | 1739-1811 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 1857-1875 |
| SV40 polyA signal | 2149-2270 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2277-2732 |
| SV40 promoter | 2865-3222 |
| Zeocin™ resistance ORF | 3257-3631 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3863-3910 |
| pUC origin | 4239-4827 |
pCMV-N-Flag-Zeo的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2783 pCMV-N-Flag-Zeo.pdf
pCMV-N-Flag-Zeo中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Flag-Zeo)包括：
| Afe I | Afl II | Age I | Asc I | AsiS I | Bae I |
| BbsI | BbvC I | Blp I | Bpu10 I | Bsg I | BsiW I |
| BsmB I | BspE I | BspQ I | BsrG I | BstE II | BstZ17 I |
| EcoN I | Esp3 I | Kas I | Nar I | Nru I | PflF I |
| PflM I | PluT I | Pme I | Pml I | PpuM I | PshA I |
| PspX I | Rsr II | Sap I | Sbf I | Sfo I | Swa I |
| Tth111 I | Xcm I |
pCMV-N-Flag-Zeo中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Flag-Zeo once)包括：
| AccI | GT`MK,AC | 1777 | MluI | A`CGCG,T | 2271 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 135 | MscI | TGG|CCA | 3260 |
| AleI | CACNN|NNGTG | 1695 | NdeI | CA`TA,TG | 1274 |
| ApaI | G,GGCC`C | 1806 | NheI | G`CTAG,C | 1631 |
| BamHI | G`GATC,C | 1746 | NotI | GC`GGCC,GC | 1702 |
| BcgI | NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 639 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1788 |
| BclI | T`GATC,A | 2042 | PciI | A`CATG,T | 4883 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN | 3683 | PspOMI | G`GGCC,C | 1806 |
| BglII | A`GATC,T | 1782 | PstI | C,TGCA`G | 1758 |
| BmgBI | CAC|GTC | 3391 | PvuII | CAG|CTG | 2883 |
| BmtI | G,CTAG`C | 1631 | SacI | G,AGCT`C | 1685 |
| BspDI | AT`CG,AT | 3225 | SacII | CC,GC`GG | 1694 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN | 3683 | SalI | G`TCGA,C | 1776 |
| BssHII | G`CGCG,C | 3293 | ScaI | AGT|ACT | 616 |
| BstBI | TT`CG,AA | 3647 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3157 |
| BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 1693 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 3371 |
| ClaI | AT`CG,AT | 3225 | SmaI | CCC|GGG | 1741 |
| CspCI | NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 1414 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
| EarI | CTCTTCN`NNN, | 931 | SpeI | A`CTAG,T | 1800 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | SrfI | GCCC|GGGC | 1741 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1764 | StuI | AGG|CCT | 3206 |
| EcoRV | GAT|ATC | 1772 | TspMI | C`CCGG,G | 1739 |
| FseI | GG,CCGG`CC | 3529 | XbaI | T`CTAG,A | 1794 |
| HindIII | A`AGCT,T | 1752 | XhoI | C`TCGA,G | 1788 |
| HpaI | GTT|AAC | 2148 | XmaI | C`CCGG,G | 1739 |
| MfeI | C`AATT,G | 2135 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
pCMV-N-Flag-Zeo质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
T7 primer (1857-1875): 5' TAATACGACTCACTATAGG 3'
pCMV-N-Flag-Zeo的全序列信息:D2783 pCMV-N-Flag-Zeo-seq.txt
不同真核表达质粒的比较和选择，以及标签和抗性的考虑可以参考如下网页：
https://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001001001004
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2783-1μg | pCMV-N-Flag-Zeo | 1μg |
| D2783-100μg | pCMV-N-Flag-Zeo | 100μg |
| － | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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