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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2789-1μg | pCMV-N-Flag-Pur | 1μg | 888.00元 |
| D2789-100μg | pCMV-N-Flag-Pur | 100μg | 1169.00元 |
pCMV-N-Flag-Pur是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有Flag标签(Flag Tag, DYKDDDDK)的目的蛋白的表达质粒。该质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5′端含有一个编码Flag标签的序列，可以表达含有Flag标签的融合蛋白，因此可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。
pCMV-N-Flag-Pur质粒为氨苄青霉素抗性和嘌呤霉素(Puromycin)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌，而在转染哺乳动物细胞后，可利用其Puromycin抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Puromycin (ST551)可以从碧云天购买。
Puromycin是来源于白黑链霉菌的一种氨基苷类抗生素，可通过打乱核糖体上的肽转运，造成翻译过程中不成熟终止，从而抑制蛋白质合成，抑制或杀死细胞。链霉菌(Streptomyces alboniger)来源的pac基因所编码的嘌呤霉素N-乙酰转移酶 (Puromycin N-acetyl-tranferase)可以催化Puromycin发生乙酰化修饰而失活，使细胞对Puromycin产生抗性。因此，Puromycin可用来筛选成功转染携带Puromycin抗性基因质粒的原核或真核细胞。
Puromycin是一种强效翻译抑制剂，作用迅速。一般2天内可以杀死99%的不表达pac基因的细胞，通常可在不到一周的时间内即可筛选到具有Puromycin抗性的稳定哺乳动物细胞系。推荐工作浓度范围为0.5-5μg/ml，实际使用时应针对不同的细胞系测试Puromycin的浓度梯度，以确定最佳使用浓度。
pCMV-N-Flag-Pur质粒(5160bp)的图谱如下：
pCMV-N-Flag-Pur质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| Ampicillin resistance ORF | 63-923 |
| CMV promoter | 1405-1608 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 1654-1672 |
| Flag tag | 1713-1736 |
| Multiple cloning site (XmaI-ApaI) | 1739-1811 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 1857-1875 |
| SV40 polyA signal | 2149-2270 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2277-2732 |
| SV40 promoter | 2865-3222 |
| Puromycin resistance ORF | 3257-3856 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 4088-4135 |
| pUC origin | 4464-5052 |
pCMV-N-Flag-Pur的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2789 pCMV-N-Flag-Pur.pdf
pCMV-N-Flag-Pur中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Flag-Pur)包括：
| Afe I | Afl II | Age I | Asc I | AsiS I | Bae I |
| BbsI | BbvC I | Blp I | BmgB I | Bsg I | BspQ I |
| BsrG I | BstZ17 I | EcoN I | Fse I | Nru I | PflM I |
| Pme I | Pml I | PpuM I | PshA I | PspX I | Sap I |
| Sbf I | SgrA I | Swa I | Xcm I |
pCMV-N-Flag-Pur中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Flag-Pur once)包括：
| AccI | GT`MK,AC | 1777 | MfeI | C`AATT,G | 2135 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 135 | MluI | A`CGCG,T | 2271 |
| AleI | CACNN|NNGTG | 1695 | MscI | TGG|CCA | 3632 |
| ApaI | G,GGCC`C | 1806 | NdeI | CA`TA,TG | 1274 |
| BamHI | G`GATC,C | 1746 | NheI | G`CTAG,C | 1631 |
| BclI | T`GATC,A | 2042 | NotI | GC`GGCC,GC | 1702 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN | 3908 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1788 |
| BglII | A`GATC,T | 1782 | PciI | A`CATG,T | 5108 |
| BmtI | G,CTAG`C | 1631 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3299 |
| Bpu10I | CC`TNA,GC | 3853 | PspOMI | G`GGCC,C | 1806 |
| BseRI | GAGGAG(N)8,NN | 3201 | PstI | C,TGCA`G | 1758 |
| BsiWI | C`GTAC,G | 3313 | PvuII | CAG|CTG | 2883 |
| BsmBI | CGTCTCN`NNNN | 3649 | RsrII | CG`GWC,CG | 3373 |
| BspDI | AT`CG,AT | 3225 | SacI | G,AGCT`C | 1685 |
| BspEI | T`CCGG,A | 3370 | SalI | G`TCGA,C | 1776 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN | 3908 | ScaI | AGT|ACT | 616 |
| BssHII | G`CGCG,C | 3712 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3157 |
| BstBI | TT`CG,AA | 3872 | SmaI | CCC|GGG | 1741 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 3391 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
| BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 1693 | SpeI | A`CTAG,T | 1800 |
| ClaI | AT`CG,AT | 3225 | SrfI | GCCC|GGGC | 1741 |
| CspCI | NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 1414 | TspMI | C`CCGG,G | 1739 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3299 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1764 | XbaI | T`CTAG,A | 1794 |
| EcoRV | GAT|ATC | 1772 | XhoI | C`TCGA,G | 1788 |
| Esp3I | CGTCTCN`NNNN | 3649 | XmaI | C`CCGG,G | 1739 |
| HindIII | A`AGCT,T | 1752 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
| HpaI | GTT|AAC | 2148 |
pCMV-N-Flag-Pur质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
T7 primer (1857-1875): 5' TAATACGACTCACTATAGG 3'
pCMV-N-Flag-Pur的全序列信息:D2789 pCMV-N-Flag-Pur-seq.txt
不同真核表达质粒的比较和选择，以及标签和抗性的考虑可以参考如下网页：
https://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001001001004
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2789-1μg | pCMV-N-Flag-Pur | 1μg |
| D2789-100μg | pCMV-N-Flag-Pur | 100μg |
| － | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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