pNFκB-TA-luc-CP(超灵敏快速降解型报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于NFκB转录活性(Transcriptional activity) 快速响应、超灵敏检测的报告基因质粒。本质粒的主要特点是使用了可以被细胞内泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system, UPS)识别并快速降解的luc-CP，即包含了泛素化修饰识别序列CP (CL1 and PEST)的luciferase，确保了更低的背景表达和更好的响应性。

NFκB也称NF-κB，NFkappaB、NF-kappaB、Nuclear factor κB、Nuclear factor-κB等，被认为是一种最常见的炎症因子转录因子(Transcriptional factor)。NFκB的核转运激活通常会导致TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子的转录激活。

pNFκB-TA-luc-CP是一种超灵敏快速降解型报告基因质粒(Super sensitive and destabilized reporter plasmid)，也被称为是快速响应萤光素酶报告基因质粒(Rapid response luciferase reporter plasmid)，是以碧云天的pGL6-TA-CP质粒(D2094)为模板，在其多克隆位点插入了多个NFκB结合位点构建而成。与pNFκB-TA-luc (D2207)相比，pNFκB-TA-luc-CP中的萤光素酶增加了泛素化修饰识别序列CP，检测NFκB转录水平时的背景信号更低、响应时间更快、信号灵敏度更高，即可以在短时间内超灵敏地检测NFκB的转录激活 (图1)，并且更适合进行NFκB转录活性的动态检测。

图1.pNFκB-TA-luc-CP(超灵敏快速降解型报告基因质粒)的检测效果图。pNFκB-TA-luc-CP与pNFκB-TA-luc质粒分别转染HEK293T细胞24h后换液，加入终浓度为10ng/ml的TNF-α (P5318)，0、1、2、4、6和12h后，使用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005)检测NFκB的转录激活水平。实际读数会因细胞数量、转染效果、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

pGL6-TA-CP质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒，该报告基因质粒和Promega公司的pGL3系列相比有了全面的改进。一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达；另一方面应用了快速降解型报告基因技术，在luciferase后增加了泛素-蛋白酶体系统识别和降解序列CL1和PEST，合并简称CP，从而可以促进luciferase-CP在细胞中的降解，降低萤光素酶的本底活性。同时整个质粒中可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

本质粒中的CP包含针对哺乳动物细胞密码子优化的降解序列hCL1和hPEST。CL1源自酿酒酵母的16个氨基酸序列，可以引导蛋白质通过泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system)降解[1]；PEST源自小鼠鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase) C端的40个氨基酸序列(富含脯氨酸/proline (P)、谷氨酸/glutamic acid (E)、丝氨酸/serine (S)和苏氨酸/threonine (T)，PEST)，该序列可通过泛素-蛋白酶体系统促进蛋白质的降解[2]。与普通报告基因相比，快速降解型报告基因的背景更低，响应性更好，检测灵敏度更高，更适合监测动态变化过程，例如转录活性的节律变化等。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

pNFκB-TA-luc-CP质粒的主要信息如下：

pNFκB-TA-luc-CP质粒的图谱如下：

pNFκB-TA-luc-CP的多克隆位点及NFκB response element的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2208 pNFκB-TA-luc-CP(超灵敏快速降解型报告基因质粒).pdf

pNFκB-TA-luc-CP中没有的酶切位点包括：

pNFκB-TA-luc-CP中的单酶切位点包括：

pNFκB-TA-luc-CP质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

RVprimer3 (5789-5808): CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC

pNFκB-TA-luc-CP的全序列信息:D2208 pNFκB-TA-luc-CP(超灵敏快速降解型报告基因质粒)-序列.txt

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