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碧云天 pCMV-jGCaMP7c (高... 当商品进行补货时,我们将以短信、邮件的形式通知您,最多发送一次,不会对您造成干扰。 |
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产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D2863-1μg | pCMV-jGCaMP7c (高对比度钙离子荧光探针) | 1μg | 888.00元 |
D2863-100μg | pCMV-jGCaMP7c (高对比度钙离子荧光探针) | 100μg | 1169.00元 |
pCMV-jGCaMP7系列质粒(jGCaMP7b/jGCaMP7c/jGCaMP7f/jGCaMP7s)是用于钙离子(Ca2+)荧光检测的哺乳动物细胞表达质粒,表达的是经过突变和优化并适用于细胞或组织中钙离子荧光检测的M13-GFP-CaM融合蛋白。M13-GFP-CaM融合蛋白这个钙离子探针(calcium probe)中,环状排列的绿色荧光蛋白(circularly permuted green fluorescent protein, cpGFP)一端和钙调蛋白(calmodulin, CaM)融合表达,另一端与可以和钙调蛋白CaM相互作用的肌球蛋白轻链激酶M13 (也称RS20)肽链融合表达。这样当钙离子结合钙调蛋白时,可以改变钙调蛋白的构象,同时也会影响和钙调蛋白相互作用的M13的构象,钙调蛋白和M13的构象改变最终导致GFP的构象改变,从而影响其荧光的强弱,最终实现对于钙离子浓度变化的检测。
图1. GCaMP7系列蛋白结构图。其中pRSET A Tag中含有6X His tag。
碧云天构建的pCMV-jGCaMP7系列质粒(jGCaMP7b/jGCaMP7c/jGCaMP7f/jGCaMP7s)是最新一代基因编码的钙离子探针系列,适用于常见细胞的细胞内钙离子水平变化检测,并且特别适合用于监测特定条件下神经元中的钙离子水平的变化。
jGCaMP7系列的四个融合蛋白与GCaMP6系列相比,各有其突出特点:高亮度钙离子荧光探针jGCaMP7b (brighter baseline fluorescence)有更亮的本底荧光,并且灵敏度可达到GCaMP6s的3倍,未结合钙离子时的荧光强度比GCaMP6s增强50%;高对比度钙离子荧光探针jGCaMP7c (high contrast with low baseline fluorescence)有高对比度低和更低的背景荧光,并且灵敏度是GCaMP6s的2.7倍,对比度显著增强;快速响应型钙离子荧光探针jGCaMP7f (fast kinetics)具有快速动力学特点,反应速率是GCaMP6f的5倍和GCaMP6s的3倍,更加适合检测钙离子的动态变化;高灵敏度钙离子荧光探针jGCaMP7s (sensitive and slow) 具有高灵敏度但响应速度相对较慢的特点,灵敏度可达GCaMP6s的5倍以上,并且响应速率也比GCaMP6s快。
pCMV-jGCaMP7系列质粒是在针对其M13-GFP-CaM融合蛋白中肽链相互作用的界面区域进行突变筛选并优化而得到的。四个融合蛋白对应的突变氨基酸序列参考表1。
表1:jGCaMP7突变位点
M13 | Linker1 | cpGFP | Linker2 | CaM | ||||||
jGCaMP7s | A52V | A317L | ||||||||
jGCaMP7f | H78K | A317L | R381T | T383S | G392R | |||||
jGCaMP7b | H78K | L302P | A317L | M374Y | ||||||
jGCaMP7c | L59Q | E60P | H78K | M378G | K379S | T383S | T412N |
jGCamP7c中的突变主要发生在Linker1(L59Q/E60P)、cpGFP(H78K)和CaM(M378G/K379S/T383S/T412N)上。pCMV-jGCaMP7c质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达,该质粒为卡那霉素抗性。
pCMV- jGCaMP7c质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
CMV promoter | 1-602 |
T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
jGCaMP7b | 693-2045 |
T7 promoter and T7 primer binding site | 2107-2128 |
SV40 polyA signal | 2140-2523 |
f1 origin of ss-DNA replication | 2661-2965 |
bla promoter | 2990-3114 |
SV40 promoter | 3134-3427 |
Neomycin/kanamycin resistance ORF | 3507-4298 |
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 4299-4757 |
pUC origin | 4886-5553 |
pCMV- jGCaMP7c质粒(5605bp)的图谱如下:
pCMV-jGCaMP7c质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2863 pCMV-jGCamP7c.pdf。
pCMV-jGCaMP7c中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-jGCaMP7b)包括:
AclI | AfeI | AflII | AgeI | AhdI | AscI | AsiSI |
BaeI | BbsI | BbvCI | BglII | BsiWI | BsmBI | BspEI |
BssHII | BstEII | BstZ17I | EcoNI | EcoRI | EcoRV | Esp3I |
FseI | HindIII | NruI | PaeR7I | PflMI | PmeI | PpuMI |
PshAI | PspXI | SbfI | ScaI | SgrAI | SwaI | XcmI |
AclI | AfeI | AflII | AgeI | AhdI | AscI | AsiSI |
pCMV-jGCaMP7c中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-jGCaMP7b once)包括:
AccI | GT`MK,AC | 799 | PciI | A`CATG,T | 5553 |
ApaI | G,GGCC`C | 2062 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3735 |
ApaLI | G`TGCA,C | 5239 | PluTI | G,GCGC`C | 3638 |
AvaI | C`YCGR,G | 680 | PmlI | CAC|GTG | 1919 |
BamHI | G`GATC,C | 687 | PspOMI | G`GGCC,C | 2058 |
BcgI | NN` (N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN | 735 | PstI | C,TGCA`G | 1744 |
BlpI | GC`TNAGC | 858 | PvuI | CG,AT`CG | 2140 |
BmgBI | CAC|GTC | 810 | RsrII | CG`GWC,CG | 4151 |
Bpu10I | CC`TNA,GC | 1029 | SacII | CC,GC`GG | 662 |
BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 4624 | SalI | G`TCGA,C | 798 |
BsaXI | ,NNN` (N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 2687 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 1609 |
BsoBI | C`YCGR,G | 680 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3410 |
BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 1609 | SfoI | GGC|GCC | 3636 |
CspCI | ,NN` (N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 382 | SmaI | CCC|GGG | 682 |
DraIII | CAC,NNN`GTG | 2753 | SnaBI | TAC|GTA | 342 |
KasI | G`GCGC,C | 3634 | SpeI | A`CTAG,T | 2052 |
MfeI | C`AATT,G | 2837 | SrfI | GCCC|GGGC | 682 |
MluI | A`CGCG,T | 2523 | StuI | AGG|CCT | 3456 |
MscI | TGG|CCA | 3717 | TspMI | C`CCGG,G | 680 |
NarI | GG`CG,CC | 3635 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3753 |
NdeI | CA`TA,TG | 240 | XbaI | T`CTAG,A | 2046 |
NotI | GC`GGCC,GC | 668 | XmaI | C`CCGG,G | 680 |
pCMV-jGCaMP7c的全序列信息:D2863pCMV-jGCamP7c序列.txt
pCMV-jGCaMP7c质粒转染Hela细胞12h后,于培养基中加入Ionomycin (2μM)后150秒内的荧光变化效果请参考图2本产品网站上的视频。
图2.pCMV-jGCaMP7c质粒转染Hela细胞12h后2μM Ionomycin处理前后的荧光变化效果图。pCMV-jGCaMP7c质粒转染培养在六孔板中的Hela细胞12h后,先用PBS洗涤细胞2-3次,加入1ml DMEM,选择适当视野,在荧光显微镜下拍摄视频。开始拍摄5-10秒后,加入1ml含有4μM Ionomycin的新鲜DMEM培养液(最终浓度为2μM Ionomycin),继续拍摄视频约2-3分钟。图中可见加入Ionomycin之前很细胞的荧光比较弱,加入Ionomycin后细胞的荧光逐渐变强,时间较长后荧光又会逐渐变弱。A. 未加Ionomycin;B. 加入Ionomycin 30s;C:加入Ionomycin 60s;D:加入Ionomycin 120s。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2863-1µg | pCMV-jGCaMP7c(高亮度钙离子荧光探针) | 1µg |
D2863-100µg | pCMV-jGCaMP7c(高亮度钙离子荧光探针) | 100µg |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
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本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
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