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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2865-1μg | pCMV-jGCaMP7f (快速响应型钙离子荧光探针) | 1μg | 888.00元 |
| D2865-100μg | pCMV-jGCaMP7f (快速响应型钙离子荧光探针) | 100μg | 1169.00元 |
pCMV-jGCaMP7系列质粒(jGCaMP7b/jGCaMP7c/jGCaMP7f/jGCaMP7s)是用于钙离子(Ca2+)荧光检测的哺乳动物细胞表达质粒，表达的是经过突变和优化并适用于细胞或组织中钙离子荧光检测的M13-GFP-CaM融合蛋白。M13-GFP-CaM融合蛋白这个钙离子探针(calcium probe)中，环状排列的绿色荧光蛋白(circularly permuted green fluorescent protein, cpGFP)一端和钙调蛋白(calmodulin, CaM)融合表达，另一端与可以和钙调蛋白CaM相互作用的肌球蛋白轻链激酶M13 (也称RS20)肽链融合表达。这样当钙离子结合钙调蛋白时，可以改变钙调蛋白的构象，同时也会影响和钙调蛋白相互作用的M13的构象，钙调蛋白和M13的构象改变最终导致GFP的构象改变，从而影响其荧光的强弱，最终实现对于钙离子浓度变化的检测。
图1. GCaMP7系列蛋白结构图。其中pRSET A Tag中含有6X His tag。
碧云天构建的pCMV-jGCaMP7系列质粒(jGCaMP7b/jGCaMP7c/jGCaMP7f/jGCaMP7s)是最新一代基因编码的钙离子探针系列，适用于常见细胞的细胞内钙离子水平变化检测，并且特别适合用于监测特定条件下神经元中的钙离子水平的变化。
jGCaMP7系列的四个融合蛋白与GCaMP6系列相比，各有其突出特点：高亮度钙离子荧光探针jGCaMP7b (brighter baseline fluorescence)有更亮的本底荧光，并且灵敏度可达到GCaMP6s的3倍，未结合钙离子时的荧光强度比GCaMP6s增强50%；高对比度钙离子荧光探针jGCaMP7c (high contrast with low baseline fluorescence)有高对比度低和更低的背景荧光，并且灵敏度是GCaMP6s的2.7倍，对比度显著增强；快速响应型钙离子荧光探针jGCaMP7f (fast kinetics)具有快速动力学特点，反应速率是GCaMP6f的5倍和GCaMP6s的3倍，更加适合检测钙离子的动态变化；高灵敏度钙离子荧光探针jGCaMP7s (sensitive and slow) 具有高灵敏度但响应速度相对较慢的特点，灵敏度可达GCaMP6s的5倍以上，并且响应速率也比GCaMP6s快。
pCMV-jGCaMP7系列质粒是在针对其M13-GFP-CaM融合蛋白中肽链相互作用的界面区域进行突变筛选并优化而得到的。四个融合蛋白对应的突变氨基酸序列参考表1。
表1：jGCaMP7突变位点
| M13 | Linker1 | cpGFP | Linker2 | CaM | ||||||
| jGCaMP7s | A52V | A317L | ||||||||
| jGCaMP7f | H78K | A317L | R381T | T383S | G392R | |||||
| jGCaMP7b | H78K | L302P | A317L | M374Y | ||||||
| jGCaMP7c | L59Q | E60P | H78K | M378G | K379S | T383S | T412N | |||
jGCamP7f中的突变主要发生在cpGFP(H78K)和CaM(A317L/R381T/T383S/G392R)上。pCMV-jGCaMP7f质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，该质粒为卡那霉素抗性。
pCMV- jGCaMP7f质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| jGCaMP7f | 693-2045 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 2107-2128 |
| SV40 polyA signal | 2140-2523 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2661-2965 |
| bla promoter | 2990-3114 |
| SV40 promoter | 3134-3427 |
| Neomycin/kanamycin resistance ORF | 3507-4298 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 4299-4757 |
| pUC origin | 4886-5553 |
pCMV-jGCaMP7f质粒(5605bp)的图谱如下：
pCMV-jGCaMP7f质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2865 pCMV-jGCamP7f.pdf。
pCMV-jGCaMP7f中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-jGCaMP7b)包括：
| AclI | AfeI | AgeI | AhdI | AscI | AsiSI | BaeI |
| BbsI | BbvCI | BglII | BsiWI | BsmBI | BspEI | BssHII |
| BstEII | BstZ17I | EcoNI | EcoRI | EcoRV | Esp3I | FseI |
| HindIII | NruI | PflMI | PmeI | PpuMI | PshAI | PspXI |
| SbfI | ScaI | SgrAI | SwaI | XcmI | XmnI |
pCMV-jGCaMP7f中的单酶切位点（Restriction enzymes that cut pCMV-jGCaMP7b once）包括：
| AccI | GT`MK,AC | 799 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3735 |
| AflII | C`TTAA,G | 1536 | PluTI | G,GCGC`C | 3638 |
| ApaI | G,GGCC`C | 2062 | PmlI | CAC|GTG | 1919 |
| ApaLI | G`TGCA,C | 5239 | PspOMI | G`GGCC,C | 2058 |
| BamHI | G`GATC,C | 687 | PstI | C,TGCA`G | 1744 |
| BcgI | NN` (N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN | 735 | PvuI | CG,AT`CG | 2140 |
| BlpI | GC`TNAGC | 858 | RsrII | CG`GWC,CG | 4151 |
| BmgBI | CAC|GTC | 810 | SacII | CC,GC`GG | 662 |
| Bpu10I | CC`TNA,GC | 1029 | SalI | G`TCGA,C | 798 |
| BsaXI | ,NNN` (N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 2687 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 1609 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 1609 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3410 |
| CspCI | ,NN` (N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 382 | SfoI | GGC|GCC | 3636 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 2753 | SmaI | CCC|GGG | 682 |
| KasI | G`GCGC,C | 3634 | SnaBI | TAC|GTA | 342 |
| MfeI | C`AATT,G | 2837 | SpeI | A`CTAG,T | 2052 |
| MluI | A`CGCG,T | 2523 | SrfI | GCCC|GGGC | 682 |
| MscI | TGG|CCA | 3717 | StuI | AGG|CCT | 3456 |
| NarI | GG`CG,CC | 3635 | TspMI | C`CCGG,G | 680 |
| NdeI | CA`TA,TG | 240 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3753 |
| NotI | GC`GGCC,GC | 668 | XbaI | T`CTAG,A | 2046 |
| PaeR7I | CTCGAG | 867 | XhoI | C`TCGA,G | 867 |
| PciI | A`CATG,T | 5553 | XmaI | C`CCGG,G | 680 |
pCMV-jGCamP7f的全序列信息:D2865 pCMV-jGCamP7f序列.txt。
pCMV-jGCaMP7f质粒转染Hela细胞12h后，于培养基中加入Ionomycin (2μM)后150秒内的荧光变化效果请参考图2本产品网站上的视频。
图2. pCMV-jGCaMP7f质粒转染Hela细胞12h后2μM Ionomycin处理前后的荧光变化效果图。pCMV-jGCaMP7f质粒转染培养在六孔板中的Hela细胞12h后，先用PBS洗涤细胞2-3次，加入1ml DMEM，选择适当视野，在荧光显微镜下拍摄视频。开始拍摄5-10秒后，加入1ml含有4μM Ionomycin的新鲜DMEM培养液(最终浓度为2μM Ionomycin)，继续拍摄视频约2-3分钟。图中可见加入Ionomycin之前很细胞的荧光比较弱，加入Ionomycin后细胞的荧光逐渐变强，时间较长后荧光又会逐渐变弱。A. 未加Ionomycin；B. 加入Ionomycin 30s；C：加入Ionomycin 60s；D：加入Ionomycin 120s。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2865-1μg | pCMV-jGCaMP7f (快速响应型钙离子荧光探针) | 1μg |
| D2865-100μg | pCMV-jGCaMP7f (快速响应型钙离子荧光探针) | 100μg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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