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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2906-1μg | pET-N-His-TEV-QUEEN2m (细菌ATP荧光探针) | 1μg | 888.00元 |
| D2906-100μg | pET-N-His-TEV-QUEEN2m (细菌ATP荧光探针) | 100μg | 1169.00元 |
pET-N-His-TEV-QUEEN2m (细菌ATP荧光探针)是碧云天研发的一种用于在细菌中表达N端含有His标签(His tag)的QUEEN2m融合蛋白以作为ATP荧光探针的原核工具质粒，可以用于活体实时检测单个细菌内ATP水平或QUEEN2m的原核表达纯化。
使用本产品时推荐同时使用D2909 pET-N-His-TEV-QUEEN NA (ATP荧光探针对照质粒)作为对照。
本质粒N端His标签后含有TEV酶切位点，可通过TEV Protease (P2307/P2308)切除N端的His标签。
QUEEN (Quantitative Evaluator of Cellular Energy)是一个单一的环状排列的荧光蛋白(circularly-permuted fluorescent protein)和细菌ATP结合蛋白融合表达而成。QUEEN对细菌生长速率的改变不敏感(insensitive to bacteria growth changes)。许多细菌细胞内根据QUEEN的荧光所计算的胞内ATP浓度与根据萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)方法检测所计算得出的胞内ATP浓度几乎完全一致，因此QUEEN适合用于定量检测细菌内的绝对ATP浓度。从很多单个细菌收集的QUEEN荧光信号进行分析时发现，即使是遗传背景相同的大肠杆菌细胞，在相同培养条件下，细胞内的绝对ATP浓度也是不同的。
基因编码的ATP荧光探针QUEEN7µ荧光蛋白，由环型排列的增强型绿色荧光蛋白cpEGFP (circularly-permuted enhanced green fluorescent protein)插入到嗜热芽孢杆菌(thermophilic Bacillus) PS3的FoF1-ATP合成酶的ε亚基的两个α螺旋之间组成，在接头处分别由两个氨基酸的接头(TR和LG)进行连接。当ATP结合于FoF1-ATP合成酶的ε亚基的时候，会引起整个蛋白发生构象变化。激发波长400nm/发射波长513nm的荧光强度与激发波长494nm/发射波长513nm的荧光强度的比值对ATP的浓度变化做出响应。QUEEN7µ是一个高亲和力的ATP荧光探针(Kd~7µM at 25℃)，但对ADP没有亲和力。对于正常的活细菌而言，QUEEN7µ对ATP的亲和力可能过高，而较难检测出较高浓度ATP水平的变化。但对于特定条件导致的细菌内低ATP水平时，比较适合使用QUEEN7µ进行ATP的荧光检测。也可以使用表达纯化的QUEEN7µ进行体外体系的ATP实时浓度检测。
基因编码的ATP荧光探针QUEEN2m荧光蛋白，是QUEEN7µ的突变体，通过用源自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的FoF1-ATP合成酶的ε亚基的1-107aa取代QUEEN7µ中的源自嗜热芽孢杆菌(thermophilic Bacillus) PS3的FoF1-ATP合成酶ε亚基的1-107aa。仍然以激发波长400nm/发射波长513nm的荧光强度与激发波长494nm/发射波长513nm的荧光强度的比值对ATP的浓度变化做出响应。但QUEEN2m是一个低亲和力的ATP荧光探针，更适合检测ATP的生理浓度(Kd~4.5mM at 25℃)。高浓度的ADP会对QUEEN2m信号产生负面影响，但效果相对较小(在生理ADP浓度下约为10%或更少)。此外QUEEN2m信号在pH7.3-8.8和生理Mg2+浓度(1-2mM)范围内几乎不受影响。
图1.QUEEN7µ、QUEEN2m和QUEEN NA的蛋白结构图。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面，带有一个His标签的编码序列，含有6个组氨酸(6X His)。
本载体在N端His标签与多克隆位点之间含有TEV蛋白酶(TEV Protease)识别的七肽序列ENLYFQG，对应的核酸序列为GAGAACCTGTACTTCCAAGGG，因此可在QUEEN2m蛋白纯化后用TEV蛋白酶切除N端His标签。TEV蛋白酶酶切发生在七肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除His标签的时候目的蛋白的N端会留下一个额外的氨基酸残基G。
通常可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化带有His标签的QUEEN2m，并可以使用His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化QUEEN2m。
本质粒为卡那霉素抗性。
pET-N-His-TEV-QUEEN2m质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| f1 origin | 12-467 |
| Kanamycin resistance ORF | 563-1645 |
| PBR 322 origin | 2084 |
| LacI coding sequence | 3518-4597 |
| T7 promoter | 4988-5004 |
| His tag coding sequence | 5079-5096 |
| TEV Protease recognition site sequence | 5097-5117 |
| QUEEN2m | 5124-6266 |
| T7 Terminator | 6364-6410 |
pET-N-His-TEV-QUEEN2m质粒(6417bp)的图谱如下：
pET-N-His-TEV-QUEEN2m的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2906 pET-N-His-TEV-QUEEN2m (细菌ATP荧光探针).pdf
pET-N-His-TEV-QUEEN2m中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-TEV-QUEEN2m)包括：
| AatII | Acc65I | AflII | AgeI | AhdI | AscI | AvrII |
| BaeI | BbvCI | BfuAI | BmgBI | BmtI | BsaI | BsiWI |
| BspMI | BstBI | Bsu36I | CspCI | DraI | EagI | Eco53kI |
| EcoRI | FseI | HindIII | KpnI | MfeI | MscI | NcoI |
| NheI | NotI | PacI | PmeI | PmlI | PspXI | PstI |
| RsrII | SacI | SacII | SalI | SbfI | ScaI | SexAI |
| SfiI | SnaBI | SpeI | SrfI | StuI | SwaI | ZraI |
pET-N-His-TEV-QUEEN2m中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-His-TEV-QUEEN2m)包括：
| AlwNI | CAG,NNN`CTG | 1729 | NdeI | CA`TA,TG | 5074 |
| AsiSI | GCG,AT`CGC | 943 | NruI | TCG|CGA | 1286 |
| BamHI | G`GATC,C | 5118 | PaeR7I | C`TCGA,G | 6273 |
| BclI | T`GATC,A | 4228 | PciI | A`CATG,T | 2141 |
| BglII | A`GATC,T | 6267 | PflFI | GACN`N,NGTC | 2399 |
| BseRI | GAGGAG(N)8,NN` | 5779 | PpuMI | RG`GWC,CY | 3136 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 2258 | PshAI | GACNN|NNGTC | 3401 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 5725 | PsiI | TTA|TAA | 370 |
| BssHII | G`CGCG,C | 3831 | PvuI | CG,AT`CG | 943 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 4563 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 2258 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 4060 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 4923 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 2374 | SmaI | CCC|GGG | 1069 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 242 | SphI | G,CATG`C | 4771 |
| EcoRV | GAT|ATC | 5180 | TspMI | C`CCGG,G | 1067 |
| FspI | TGC|GCA | 3164 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 2399 |
| HincII | GTY|RAC | 3740 | XbaI | T`CTAG,A | 5034 |
| HpaI | GTT|AAC | 3740 | XhoI | C`TCGA,G | 6273 |
| MluI | A`CGCG,T | 4242 | XmaI | C`CCGG,G | 1067 |
pET-N-His-TEV-QUEEN2m的全序列信息:D2906 pET-N-His-TEV-QUEEN2m全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2906-1μg | pET-N-His-TEV-QUEEN2m | 1μg |
| D2906-100μg | pET-N-His-TEV-QUEEN2m | 100μg |
| － | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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