碧云天研发的pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template是一种用于体外基于T3、SP6或T7 Promoter进行RNA转录的线性化质粒模板。该质粒中的PstI/SacI位点反向插入了人β-actin基因的125bp cDNA片段(X00351的823-947核苷酸片段)，已经用HindIII限制性内切酶进行了线性化处理，可以直接使用T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶的任何一种进行体外转录。从本线性化模板可以转录产生与人β-actin mRNA互补的RNA探针，也可以用于测定T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶的活性。

当使用T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶进行体外转录时，获得的RNA的长度分别为221nt、198nt和175nt。推荐使用碧云天生产的R7006 SP6 RNA Polymerase、R7009 T3 RNA Polymerase和R7012 T7 RNA Polymerase。

从该模板合成的转录产物可用作核糖核酸酶和S1核酸酶保护试验的探针；在Northern和Dot blots中可作为内参或用于建立每个样品中RNA相对量的参考；与人总RNA杂交可保护人β-actin mRNA的125个核苷酸片段不被RNase A和RNase T1消化。

pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide

Position

Ampicillin promoter

96-200

Ampicillin resistance ORF

201-1061

ori

1232-1820

lac promoter

2144-2174

lac operator

2182-2198

M13 reverse primer binding site

2206-2222

T3 promoter

2238-2257

SP6 promoter

2261-2280

T7 promoter

2284-2303

β-actin-125-Human Antisense Template

2327-2451

Multiple cloning site

2307-2326/2452-2480

M13 forward primer binding site

2484-2500

pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template质粒(2878bp)的图谱如下：

pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2308 pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template (RNA体外转录质粒).pdf。

pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template)包括：

 AccI 

 AfeI 

 AflII 

 AgeI 

 AleI 

 ApaI 

 AscI 

 AsiSI 

 AvrII 

 BaeI 

 BbsI 

 BbvCI 

 BclI 

 BfuAI 

 BglII 

 BlpI 

 BmtI 

 Bpu10I 

 BsaAI 

 BsaBI 

 BseRI 

 BsgI 

 BsiWI 

 BsmFI 

 BsmI 

 BspDI 

 BspEI 

 BspMI 

 BsrGI 

 BssHII 

 BstBI 

 BstEII 

 BstXI 

 BstZ17I 

 Bsu36I 

 BtgZI 

 ClaI 

 CspCI 

 DraIII 

 EcoNI 

 EcoRV 

 FseI 

 HincII 

 HpaI 

HindIII

 MfeI 

 MluI 

 MscI 

 NaeI 

 NcoI 

 NgoMIV 

 NheI 

 NruI 

 NsiI 

 PacI 

 PaeR7I 

 PaqCI 

 PflFI 

 PflMI 

 PmeI 

 PmlI 

 PpuMI 

 PshAI 

 PsiI 

 PspOMI 

 PspXI 

 RsrII 

 SalI 

 SbfI 

 SexAI 

 SfiI 

 SgrAI 

 SnaBI 

 SpeI 

 SphI 

 SrfI 

 StuI 

 StyI 

 SwaI 

 Tth111I 

 XcmI 

 XhoI 

pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template)包括：

AatII

G,ACGT`C

65

KasI

G`GCGC,C

2639

Acc65I

G`GTAC,C

2315

KpnI

G,GTAC`C

2135

AflIII

A`CRYG,T

1876

NarI

GG`CG,CC

2640

AhdI

GACNN,N`NNGTC

987

NdeI

CA`TA,TG

2692

AlwNI

CAG,NNN`CTG

1464

NmeAIII

GCCGAG(N)19,NN`

838

AvaI

C`YCGR,G

2458

NotI

GC`GGCC,GC

2308

BamHI

G`GATC,C

2463

PciI

A`CATG,T

838

BanII

G,RGCY`C

2452

PluTI

G,GCGC`C

2308

BcgI

,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`

450

PstI

C,TGCA`G

1876

BmgBI

CAC|GTC

2374

SacI

G,AGCT`C

2639

BpmI

CTGGAG(N)14,NN`

917

SacII

CC,GC`GG

2321

BsaI

GGTCTCN`NNNN,

922

SapI

GCTCTTCN`NNN,

2452

BsaXI

,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`

2008

ScaI

AGT|ACT

2312

BseYI

C`CCAG,C

1527

SfoI

GGC|GCC

1993

BsoBI

C`YCGR,G

2458

SmaI

CCC|GGG

507

BspQI

GCTCTTCN`NNN,

1993

SspI

AAT|ATT

2461

BsrFI

R`CCGG,Y

903

TspMI

C`CCGG,G

2460

BstAPI

GCAN,NNN`NTGC

2693

XbaI

T`CTAG,A

183

BtgI

C`CRYG,G

2311

XmaI

C`CCGG,G

2458

EagI

C`GGCC,G

2308

XmnI

GAANN`NNTTC

388

Eco53kI

GAG|CTC

2454

ZraI

GAC|GTC

67

EcoO109I

RG`GNC,CY

8

EcoRI

G`AATT,C

2232

pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template的全序列信息：D2308 pT3_SP6_T7 RNA Template (Linearized)全序列.txt

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

如果用于制备RNA探针并用于RNase Protection Assay (RPA)实验，即Nuclease Protection Assay (NPA)实验，建议对制备的RNA探针进行PAGE纯化。

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。