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碧云天研发的pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template是一种用于体外基于T3、SP6或T7 Promoter进行RNA转录的线性化质粒模板。该质粒中的PstI/SacI位点反向插入了人β-actin基因的125bp cDNA片段(X00351的823-947核苷酸片段)，已经用HindIII限制性内切酶进行了线性化处理，可以直接使用T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶的任何一种进行体外转录。从本线性化模板可以转录产生与人β-actin mRNA互补的RNA探针，也可以用于测定T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶的活性。
当使用T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶进行体外转录时，获得的RNA的长度分别为221nt、198nt和175nt。推荐使用碧云天生产的R7006 SP6 RNA Polymerase、R7009 T3 RNA Polymerase和R7012 T7 RNA Polymerase。
从该模板合成的转录产物可用作核糖核酸酶和S1核酸酶保护试验的探针；在Northern和Dot blots中可作为内参或用于建立每个样品中RNA相对量的参考；与人总RNA杂交可保护人β-actin mRNA的125个核苷酸片段不被RNase A和RNase T1消化。
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template质粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
Ampicillin promoter
96-200
Ampicillin resistance ORF
201-1061
ori
1232-1820
lac promoter
2144-2174
lac operator
2182-2198
M13 reverse primer binding site
2206-2222
T3 promoter
2238-2257
SP6 promoter
2261-2280
T7 promoter
2284-2303
β-actin-125-Human Antisense Template
2327-2451
Multiple cloning site
2307-2326/2452-2480
M13 forward primer binding site
2484-2500
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template质粒(2878bp)的图谱如下：
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2308 pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template (RNA体外转录质粒).pdf。
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template)包括：
AccI
AfeI
AflII
AgeI
AleI
ApaI
AscI
AsiSI
AvrII
BaeI
BbsI
BbvCI
BclI
BfuAI
BglII
BlpI
BmtI
Bpu10I
BsaAI
BsaBI
BseRI
BsgI
BsiWI
BsmFI
BsmI
BspDI
BspEI
BspMI
BsrGI
BssHII
BstBI
BstEII
BstXI
BstZ17I
Bsu36I
BtgZI
ClaI
CspCI
DraIII
EcoNI
EcoRV
FseI
HincII
HpaI
HindIII
MfeI
MluI
MscI
NaeI
NcoI
NgoMIV
NheI
NruI
NsiI
PacI
PaeR7I
PaqCI
PflFI
PflMI
PmeI
PmlI
PpuMI
PshAI
PsiI
PspOMI
PspXI
RsrII
SalI
SbfI
SexAI
SfiI
SgrAI
SnaBI
SpeI
SphI
SrfI
StuI
StyI
SwaI
Tth111I
XcmI
XhoI
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template)包括：
AatII
G,ACGT`C
65
KasI
G`GCGC,C
2639
Acc65I
G`GTAC,C
2315
KpnI
G,GTAC`C
2135
AflIII
A`CRYG,T
1876
NarI
GG`CG,CC
2640
AhdI
GACNN,N`NNGTC
987
NdeI
CA`TA,TG
2692
AlwNI
CAG,NNN`CTG
1464
NmeAIII
GCCGAG(N)19,NN`
838
AvaI
C`YCGR,G
2458
NotI
GC`GGCC,GC
2308
BamHI
G`GATC,C
2463
PciI
A`CATG,T
838
BanII
G,RGCY`C
2452
PluTI
G,GCGC`C
2308
BcgI
,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`
450
PstI
C,TGCA`G
1876
BmgBI
CAC|GTC
2374
SacI
G,AGCT`C
2639
BpmI
CTGGAG(N)14,NN`
917
SacII
CC,GC`GG
2321
BsaI
GGTCTCN`NNNN,
922
SapI
GCTCTTCN`NNN,
2452
BsaXI
,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`
2008
ScaI
AGT|ACT
2312
BseYI
C`CCAG,C
1527
SfoI
GGC|GCC
1993
BsoBI
C`YCGR,G
2458
SmaI
CCC|GGG
507
BspQI
GCTCTTCN`NNN,
1993
SspI
AAT|ATT
2461
BsrFI
R`CCGG,Y
903
TspMI
C`CCGG,G
2460
BstAPI
GCAN,NNN`NTGC
2693
XbaI
T`CTAG,A
183
BtgI
C`CRYG,G
2311
XmaI
C`CCGG,G
2458
EagI
C`GGCC,G
2308
XmnI
GAANN`NNTTC
388
Eco53kI
GAG|CTC
2454
ZraI
GAC|GTC
67
EcoO109I
RG`GNC,CY
8
EcoRI
G`AATT,C
2232
pT3/SP6/T7-RNA Linearized Template的全序列信息：D2308 pT3_SP6_T7 RNA Template (Linearized)全序列.txt
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
如果用于制备RNA探针并用于RNase Protection Assay (RPA)实验，即Nuclease Protection Assay (NPA)实验，建议对制备的RNA探针进行PAGE纯化。
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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