pCMV-CD81-EGFP是碧云天自行研发的一种可以在哺乳动物细胞中通过CMV启动子表达人源CD81-EGFP融合蛋白的的质粒。本产品可用于外泌体的示踪研究，用于研究外泌体的形成、分泌、靶向和运输机制。该质粒带有卡那霉素(Kanamycin)抗性。

外泌体(Exosome)是膜包裹的细胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)，直径约为40-160nm，具有脂质双分子层结构，天然存在于血液、尿液、脑脊液，以及体外培养细胞的上清液中[1]，几乎所有类型的细胞都可以产生并释放外泌体[2]。如图1所示，细胞膜内吞(Endocytosis)依次形成初级内体(Early sorting endosome, ESE)、次级内体(Late sorting endosome, LSE)和多囊泡体(Multivesicular body, MVB)，其中多囊泡体包含腔内囊泡(Intraluminal vesicles, ILVs)。多囊泡体与细胞膜融合形成外泌体，外泌体携带多种来自其母体细胞的成分(包括核酸、蛋白质、脂类和代谢物等)释放到胞外基质中[3]。外泌体可以被附近或远距离的细胞识别和融合，是细胞间进行相互调控的重要媒介，参与了癌症、神经退行性病变和炎症性疾病等多种疾病的发病过程，影响细胞多方面的功能[4-5]。

图1. 外泌体的形成原理及其携带的母体细胞的成分示意图。

外泌体标记标志蛋白(Protein biomarkers for exosome)，也称外泌体蛋白标志物(Protein markers for exosome)，可以用于鉴定、观察、标记和纯化外泌体。据外泌体据库(ExoCarta, http://www.exocarta.org)统计来自不同生物、细胞类型和体液的外泌体中已发现9769种蛋白质，ExoCarta列出了100种常见外泌体标记蛋白标志物(http://exocarta.org/exosome_markers_new)，其中CD9、CD63、CD81、Alix、Flotillin、Ceramide和Tumor susceptibility gene 101 (TSG101)是最常用的外泌体标志蛋白标志物(如图2所示[3])。CD81在人体中由CD81基因编码的蛋白质抗原，是跨膜四超家族(Transmembrane 4 superfamily)成员之一，为4次跨膜蛋白，大量存在于细胞外囊泡的表面，也会出现在普通的细胞膜表面。CD81是最常用的外泌体标志蛋白标志物之一，参与B、T细胞的粘附、形态、激活、增殖和分化等过程，此外，CD81还与病毒感染相关，尤其在丙型肝炎病毒侵入细胞过程中发挥着重要作用[6]。

图2. 常见的外泌体标志蛋白标志物示意图。

pCMV-CD81-EGFP质粒转染HEK293T细胞的效果如图3所示。

图3. 碧云天生产的pCMV-CD81-EGFP (D2831)质粒转染HEK293T细胞效果图。pCMV-CD81-EGFP质粒转染HEK293T细胞24小时后，经荧光显微镜观察。实际荧光强度会因实验仪器、检测条件的不同而存在差异，本图仅供参考。

pCMV-CD81-EGFP质粒的主要信息如下：

pCMV-CD81-EGFP质粒(5384bp)的图谱如下：

pCMV-CD81-EGFP质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2831 pCMV-CD81-EGFP (外泌体示踪用).pdf。

pCMV-CD81-EGFP中没有的酶切位点包括：

pCMV-CD81-EGFP中的单酶切位点包括：

pCMV-CD81-EGFP质粒推荐使用的测序引物序列如下：

CMV-F primer (519-539): 5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'

pCMV-CD81-EGFP的全序列信息:D2831 pCMV-CD81-EGFP-全长序列.txt。

-20℃保存。

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。