碧云天生产的T5 Exonuclease，即T5核酸外切酶，是一种按照5'→3'方向降解双链或单链DNA的核酸外切酶。T5 Exonuclease既能从单链或双链DNA 5'末端起始消化，也可以从线性或环状双链DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)处起始消化。T5 Exonuclease无法降解超螺旋双链DNA，并且其降解单链DNA的活性可以通过将反应缓冲液中的Mg²⁺降低到低于1mM而进行抑制。基于以上特性，T5 Exonuclease常被用于Gibson组装(Gibson Assembly)。

Gibson组装是在恒温条件下，有效连接带有多个重叠序列片段的技术，其基本原理可以概括为三步：(1) T5核酸外切酶从DNA片段的5'末端开始消化，产生互补的单链3'末端(overhangs)，促使互补的末端退火；(2) DNA聚合酶填补退火片段的缺口(gaps)；(3) DNA连接酶将组装后的切刻(nicks)处进行连接，最后得到一个完整的双链DNA。

碧云天生产的T5 Exonuclease消化线性dsDNA的效果参考图1。

图1. 碧云天生产的T5 Exonuclease消化线性dsDNA的效果图。在50µl反应体系(50mM Potassium Acetate, 20mM Tris-acetate pH 7.9, 10mM Magnesium Acetate, 1mM DTT)中，加入通过PCR扩增产生的1μg 646bp片段，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的T5 Exonuclease，37℃孵育10min进行反应，反应完毕后立即置于冰浴，并加入1.2μl 0.5M EDTA以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行2%琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的降解双链线性DNA的效果。

碧云天生产的T5 Exonuclease消化线性ssDNA的效果参考图2。

图2. 碧云天生产的T5 Exonuclease消化线性ssDNA的效果图。在50µl反应体系(50mM Potassium Acetate, 20mM Tris-acetate pH7.9, 10mM Magnesium Acetate, 1mM DTT)中，加入人工合成的1μg 59nt片段，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的T5 Exonuclease，37℃孵育30min进行反应，反应完毕后立即置于冰浴，并加入1.2μl 0.5M EDTA以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行7M Urea+15%聚丙烯酰胺凝胶电泳(冰浴条件下用1X TBE作为电泳液,180V电泳120min；之后用D0140 Gel-Red溶液(5000:1)室温染色20min，即可拍照观察结果)。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的降解单链线性DNA的效果。

用途：常用于Gibson组装；降解线性单链、双链DNA或缺刻质粒DNA；从连接的环状双链DNA中去除不完全连接产物；降解线性和缺刻质粒DNA，以获得高纯度的超螺旋质粒DNA；去除碱裂法提取质粒过程中产生的变性质粒DNA；提高小量抽提质粒cDNA文库的转染效率。

来源：纯化自表达T5 噬菌体D15基因质粒的E.coli菌株。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1 nmol of acid soluble deoxyribonucleotide from double-stranded DNA in 30 minutes at 37 ℃ in a total reaction volume of 50µl.

纯度：不含T5 Exonuclease之外的DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。

酶储存液：50mM Tris-HCl (pH7.5, 25℃), 100mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 0.1% (v/v)Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol。

10X Reaction Buffer：200mM Tris-acetate (pH7.9, 25℃), 500mM Potassium Acetate, 100mM Magnesium Acetate, 10mM DTT。

失活或抑制：加入EDTA至终浓度为至少11mM或含有SDS的DNA loading buffer (SDS的最终浓度为0.08%)可使T5 Exonuclease失活。

-20℃保存，三年有效。

T5 Exonuclease是一种对于DNA底物有选择性的核酸外切酶，其对不同的DNA底物显示出不同的反应活性。因此，消化特定的底物时，须注意适当控制好酶量和反应时间。

T5 Exonuclease的最佳反应温度为37℃，但是在50℃也具有一定活性，因此可用于Gibson组装。

T5 Exonuclease在普通PCR buffer中也具有活性。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。