全部商品分类
常规试剂、生化试剂
通用耗材
实验室常用设备
生命科学仪器
水质、物性检测
光学、色谱相关
安全、环境监测
专业、行业仪器

碧云天 Antarctic Phosphatase(Thermosensitive磷酸酶)(D7028S)

修饰酶

售价¥ 降价通知

市场价¥215
  • 累积评价0人评价

  • 累计销量 1件

  • 赠送积分215

卖家:平台自营
商家名称    i实验室
在线客服      和我联系
客 服 QQ     QQ
客服邮件    
iallab@126.com
客服电话    
400-069-1717
所在地区:
上海市

扫一扫,手机访问微商城

推荐精品

最近上新

  • 商品名称:碧云天 Antarctic Phosphatase(Thermosensitive磷酸酶)(D7028S)
  • 商品编号:D7028S
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2022-08-25
  • 商品毛重:10克
  • 库存: 10009
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7028S Antarctic Phosphatase (Thermosensitive) 1000U 215.00元
D7028M Antarctic Phosphatase (Thermosensitive) 5000U 858.00元

碧云天生产的Antarctic Phosphatase (Thermosensitive),是一种源自南极微生物的、热敏感的重组表达纯化的磷酸酶,可以催化去除DNA、RNA、dNTP、rNTP 5'或3’末端磷酸基团。DNA或RNA 5’端脱去磷酸基团(简称脱磷或去磷)后就不能被连接酶(ligase)所连接,常用于避免载体的自连、提高基因克隆时的阳性率、选择性连接特定序列等。

Antarctic Phosphatase也可以脱去蛋白质丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上的磷酸基团。

Antarctic Phosphatase是一种新型碱性磷酸酯酶,在碧云天的各种内切酶和PCR缓冲液中可保持不低于100%的活性,对于各种类型的DNA 5’末端的去磷酸化均可在37℃孵育15分钟即可完成,并且75℃孵育5分钟即可完全失活。

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos, EC 3.1.3.1)常被称作碱性磷酸酯酶,是一类水解酶,通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去,并生成磷酸根离子和自由的羟基。其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白质和生物碱等,并在碱性条件下最为有效。该酶是一组同功酶的统称。常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记,最终用于蛋白和核酸等的检测,也常用于DNA或RNA 5'和3'末端的去磷酸化(去单磷酸化),特别是质粒的5'末端去磷酸化以避免质粒自连等。

经限制性内切酶酶切的质粒5'端带有磷酸基团,在进行基因克隆时为避免质粒自连,可以使用Antarctic Phosphatase去除5'末端磷酸基团。脱去5'末端磷酸基团的质粒不能发生自连。

本产品主要特点:快速去磷酸化,只需37℃孵育15分钟即可;快速失活,75℃孵育5分钟即可完全失活;使用方便,在各种内切酶和PCR缓冲液中保持不低于100%的活性,可以和质粒DNA的酶切等同时进行;兼容性强,对于5'或3'突出末端、平端等各种DNA的脱磷酸化采用完全相同的操作步骤;适用于后续的连接反应,经Antarctic Phosphatase脱磷酸基团,并75℃孵育5分钟失活后,通过柱纯化或凝胶电泳后切胶回收纯化等适当处理后,可用于后续的连接反应。

用途:通过去除载体或DNA片段5'末端的磷酸基团,防止载体或DNA片段自连;质粒DNA同时进行内切酶消化和脱磷;通过5'末端脱磷,制备用于T4 PNK进行5'末端标记的DNA或RNA;去除DNA、RNA、rNTP和dNTP的5'末端的磷酸基团;PCR产物中去除dNTP和焦磷酸根;用于蛋白质丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的去磷酸化。

来源:大肠杆菌重组表达。Antarctic Phosphatase通常会形成同源二聚体,其单体的分子量为35kD。

酶活性定义: 1µg线性化的pUC19在37℃孵育30分钟可以导致后续的自连反应抑制率达到95%以上定义为一个活力单位。

纯度:不含DNA外切酶和内切酶,不含RNA酶。

酶储存溶液:10mM Tris-HCl (pH7.4),1mM MgCl2,0.1mM ZnCl2,50% (v/v) glycerol。

Antarctic Phosphatase Reaction Buffer (10X):500mM Bis-Tris-Propane HCl,10mM MgCl2,1mM ZnCl2,pH 6.0。

失活或抑制:75℃加热5分钟可使Antarctic Phosphatase充分失活。EDTA等金属离子螯合剂对Antarctic Phosphatase有抑制作用。

碧云天生产的Antarctic Phosphatase75℃灭活前后的酶活对比(参见图1)。

图1. 碧云天热敏碱性磷酸酶Antarctic Phosphatase 75℃灭活前后的酶活对比。以pNPP为底物进行比色法测定,灭活采用75℃加热处理5分钟。反应体系为:50µl底物缓冲液(10mM pNPP等),2µl稀释125倍后的碧云天Antarctic Phosphatase (圆形和三角形图标分别代表是否经过75℃加热处理5分钟的酶)。混匀后室温反应20分钟,每隔1 min测定一次OD405。

碧云天生产的Antarctic Phosphatase对单酶切后的载体进行脱磷处理可以大大降低载体单酶切后的自连率(参见图2)。

图2. 碧云天生产的Antarctic Phosphatase对BamHI单酶切后的pUC18载体进行脱磷处理可以大大降低载体自连。A. pUC18质粒经BamHI单酶切过夜,不使用碧云天生产的Antarctic Phosphatase进行脱磷处理,然后载体用T4 DNA连接酶进行连接、转化DH5α的实验结果。B. pUC18质粒经BamHI单酶切,使用碧云天生产的Antarctic Phosphatase在37℃脱磷处理15分钟,75℃灭活处理5分钟,然后载体用T4 DNA连接酶进行连接、转化DH5α的实验结果。本产品处理后可以使大于95%的单酶切质粒脱磷而避免自连。

碧云天生产的Antarctic Phosphatase对双酶切后的载体进行脱磷处理可以大大提高克隆的阳性率(参见图3)。

图3. 碧云天生产的Antarctic Phosphatase对EcoRI/BamHI双酶切后的pUC18载体进行脱磷处理可以大大提高克隆的阳性率。A、C. 经EcoRI/BamHI双酶切过夜的pUC18质粒未做脱磷处理,加入EcoRI/BamHI双酶切后600bp的PCR产物片段,然后用T4 DNA连接酶进行连接、转化DH5α的实验结果(A)及从该平板挑取10个单克隆、使用pUC18通用引物、进行菌落PCR的实验结果(C);B、D. 经EcoRI/BamHI双酶切的pUC18质粒使用碧云天生产的Antarctic Phosphatase在37℃脱磷处理15分钟,75℃灭活处理5分钟,柱纯化后加入经EcoRI/BamHI双酶切的后600bpPCR产物片段,然后用T4 DNA连接酶进行连接、转化DH5α的实验结果(B)及从该从平板挑取10个单克隆、使用pUC18通用引物、进行菌落PCR的实验结果(D)。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7028S-1 Antarctic Phosphatase (5U/µl) 200µl
D7028S-2 Antarctic Phosphatase Reaction Buffer (10X) 500µl
说明书 1份
产品编号 产品名称 包装
D7028M-1 Antarctic Phosphatase (5U/µl) 1ml
D7028M-2 Antarctic Phosphatase Reaction Buffer (10X) 2ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

Antarctic Phosphatase与其它碱性磷酸酶相同,其酶活性需要有Zn2+和Mg2+的存在。反应中加入1/10体积的Antarctic Phosphatase Reaction Buffer (10X),能够提供足够的Zn2+和Mg2+等以保证酶的活性。

Antarctic Phosphatase在NEB buffers 1、2、3、4和CutSmart缓冲液中时,必须同时加入Antarctic Phosphatase Reaction Buffer (10X)才有活性。

Antarctic Phosphatase在单价盐离子存在时活性增强。

Antarctic Phosphatase在EDTA等金属离子螯合剂、无机磷酸盐及磷酸盐类似物存在时,其活性被抑制。

Antarctic Phosphatase在DTT、巯基乙醇等还原剂存在时,其活性会降低。

本使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后该立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

售后保障
i实验室出售仪器设备及耗材均为原厂正品,承诺提供“正品保障”服务。
对于在i实验室商城购买仪器设备及耗材的用户均提供商品正规发票。
i实验室出售的仪器设备均享受原厂一年全国联保服务。终身提供维修!
商品评价
  • 全部评价(0)
  • 好评(0)
  • 中评(0)
  • 差评(0)
  • 用户晒单(0)
仓储包装
我们的优势
常见问题
下单后可以修改订单吗?

由本网站发货的订单,在订单打印之前可以修改,打开“订单详情”页面,点击右上角的“修改订单”即可,若没有修改订单按钮,则表示订单无法修改。

无货商品几天可以到货?

您可以通过以下方法获取商品的到货时间:若商品页面中,显示“无货”时:商品具体的到货时间是无法确定的,您可以通过商品页面的“到货通知”功能获得商品到货提醒。

订单如何取消?

如订单处于暂停状态,进入“我的订单"页面,找到要取消的订单,点击“取消订单”按钮。

可以开发票吗?

本网站所售商品都是正品行货,均开具正规发票(图书商品用户自由选择是否开发票),发票金额含配送费金额,另有说明的除外。

如何联系商家?

在商品页面右则,您可以看到卖家信息,点击“联系客服”按钮,咨询卖家的在线客服人员,已开通400电话的卖家,您可直接致电卖家。

收到的商品少了/发错了怎么办?

同个订单购买多个商品可能会分为一个以上包裹发出,可能不会同时送达,建议您耐心等待1-2天,如未收到,本网站自营商品可直接联系中翼在线客服,第三方商家商品请联系商家在线客服。

如何申请退货/换货?

登陆网站,进入“我的订单”,点击客户服务下的返修/退换货或商品右则的申请返修/退换货,出现返修及退换货首页,点击“申请”即可操作退换货及返修,提交成功后请耐心等待,由专业的售后工作人员受理您的申请。

退换货/维修需要多长时间?

一般情况下,退货处理周期(不包含检测时间):自接收到问题商品之日起 7 日之内为您处理完成,各支付方式退款时间请点击查阅退款多久可以到账;
换货处理周期:自接收到问题商品之日起 15 日之内为您处理完成;
正常维修处理周期:自接收到问题商品之日起 30 日内为您处理完成。

对比栏