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碧云天 Klenow Fragment, Exo-(没有外切酶活性的Klenow片段)(D7041S)

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  • 商品名称:碧云天 Klenow Fragment, Exo-(没有外切酶活性的Klenow片段)(D7041S)
  • 商品编号:D7041S
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2022-08-25
  • 商品毛重:10.100千克
  • 库存: 65535
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7041S Klenow Fragment, Exo- 200U 135.00元
D7041M Klenow Fragment, Exo- 1000U 505.00元
D7041L Klenow Fragment, Exo- 5000U 1936.00元

Klenow Fragment, Exo-,即没有外切酶活性的Klenow片段,是大肠杆菌聚合酶I (E.coli. DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment, Exo-保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性,但缺少完整的Klenow酶的5'→3'和3'→5'外切酶活性。

特点:由于Klenow Fragment, Exo-没有外切酶活性,其在末端补平时经常会在3'末端额外加上1个或多个核苷酸,因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。

碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-补平双链DNA 5'突出(5' overhang)末端的效果请参考图1。

图1.碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-补平双链DNA 5'突出(5' overhang)末端的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或T公司(Competitor)的Klenow Fragment, Exo-,37℃孵育10min进行反应,75℃孵育10min以终止反应。取出5μl,加入1μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,之后用NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128)室温染色15min,在紫外灯下观察实验结果。如图所示,本产品与T公司的产品相比,具有类似的催化效果。反应体系(20μl):50mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃), 5mM MgCl2, 1mM DTT, 50µM dNTP Mix, 0.5µM dsDNA with 5' overhang。dsDNA with 5' overhang (也称具有5'突出末端的双链DNA)是使用D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照该产品说明书推荐的程序,把 5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'和5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'这两条寡核苷酸进行退火反应得到的产物。

碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-不会打平双链DNA 3'突出(3' overhang)末端的效果请参考图2。

图2.碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-不会打平3'突出(3' overhang)末端的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或本公司的Klenow Fragment,37℃孵育10min进行反应,75℃孵育10min以终止反应。取出5μl,加入1μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,之后用NA-Red D0128 (EB升级换代产品,2000X)室温染色15min,在紫外灯下观察实验结果。如图所示,与本公司的Klenow Fragment相比,本产品不具有打平3'突出末端的活性。反应体系(20μl):50mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃), 5mM MgCl2, 1mM DTT, 50µM dNTP Mix, 0.5µM dsDNA with 3' overhang。dsDNA with 3' overhang (也称具有3'突出末端的双链DNA)是使用D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照该产品说明书推荐的程序,把 5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'和5'-GTCTATGTATCTATGTAT-3'这两条寡核苷酸进行退火反应得到的产物。

用途:5'突出末端的标记;随机引物法进行DNA标记;Sanger双脱氧法进行DNA测序等。

来源:由大肠杆菌表达,表达基因的来源为突变的polA基因片段。

分子量:约68kDa(单体)。

活性定义:37℃ 30分钟内,催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。

酶活性检测条件:67mM potassium phosphate (pH7.4), 6.7mM MgCl2, 1mM 2-mercaptoethanol, 0.033mM dATP, 0.033mM dTTP, 0.4MBq/ml [3H]-dTTP, 62.5µg/ml poly(dA-dT)•poly(dA-dT).

纯度:不含DNA内切酶,不含RNase。

酶储存溶液:25mM Tris-HCl (pH7.5), 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) glycerol.

Reaction Buffer (10X):500mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃), 50mM MgCl2, 10mM DTT.

缓冲液兼容性:在碧云天的内切酶反应缓冲液1X O、1X R、1X Y 、2X Y中的活性为100%,在1X B、1X G中的活性为100%;在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为100%。

失活或抑制:75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment, Exo-失活。金属离子螯合剂,无机焦磷酸盐(PPi),大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment, Exo-有抑制作用。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7041S-1 Klenow Fragment, Exo- (5U/µl) 40µl
D7041S-2 Reaction Buffer (10X) 200µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7041M-1 Klenow Fragment, Exo- (5U/µl) 200µl
D7041M-2 Reaction Buffer (10X) 1ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7041L-1 Klenow Fragment, Exo- (5U/µl) 1ml
D7041L-2 Reaction Buffer (10X) 5ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

酶使用时宜放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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