碧云天生产的T4 DNA Polymerase，即T4 DNA聚合酶，是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以在单链DNA模板和与其配对的引物存在的条件下，催化5'→3'方向的DNA合成。T4 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性，但不具有5'→3'外切酶活性。

T4 DNA Polymerase具有比DNA聚合酶I更强的3'→5'核酸外切酶活性，因此该酶是高保真的DNA聚合酶；与大肠杆菌DNA聚合酶I不同的是，T4 DNA聚合酶不具有5'→3'核酸外切酶活性。

T4 DNA Polymerase由于同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性，可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4 DNA Polymerase的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高，即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA Polymerase所消化。T4 DNA Polymerase的3'→5'外切酶活性比Klenow Fragment要高约上百倍。

碧云天生产的T4 DNA Polymerase催化5'端突出末端补平的效果请参考图1。

图1.碧云天生产的T4 DNA Polymerase催化5'端突出末端补平的效果图。使用本产品或N公司(Competitor)的T4 DNA Polymerase，在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的T4 DNA Polymerase，12℃孵育15min进行反应，反应完毕后冰浴3-5min，75℃孵育20min以终止反应。取5μl反应产物，加入1μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。180V电泳60min，之后用D0130 NA-Red (EB升级换代产品，2000X)室温染色15min，观察实验结果。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20μl)：10mM Tris-HCl (pH7.9 at 25℃), 50mM NaCl, 10mM MgCl₂, 1mM DTT, 125µM dNTP Mix, 0.5µM Template/Primer (Template:5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'；Primer:5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3')；Primer和Template按照D0251产品说明书中推荐的程序进行退火反应，之后以Primer/Template退火产物为底物，进行5'端突出末端的补平。

用途：DNA 5'或3'突出末端的平滑化和平端克隆；通过置换反应进行标记DNA探针合成；定点突变过程中第二链的合成；不依赖于连接反应的PCR产物克隆；通过引物延伸法分析mRNA转录的起始点。

来源：T4 DNA聚合酶由大肠杆菌表达纯化而来，表达基因为T4噬菌体基因43。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 37℃.

纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。

酶储存液：100mM potassium phosphate (pH6.5), 1mM DTT, 50%甘油。

10X Reaction Buffer: 100mM Tris-HCl (pH7.9 at 25℃), 500mM NaCl, 100mM MgCl₂, 10mM DTT。

失活或抑制：75℃加热20min可使T4 DNA聚合酶充分失活；金属离子螯合剂可以抑制T4 DNA聚合酶的活性。

-20℃保存。

由于该酶具有3'→5'核酸外切酶的活性，反应温度的提高、过量酶的使用、没有加入dNTP或反应时间过长都可能造成DNA 3'末端碱基被切除而形成凹端。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。