碧云天生产的Bsu DNA Polymerase, Large Fragment，即枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis, Bsu) DNA聚合酶大片段，具有5'→3' DNA聚合酶活性，不具有3'→5'和5'→3'的核酸外切酶活性。Bsu DNA聚合酶大片段具有链置换 (strand displacement)活性，常用于重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)，其等温扩增(isothermal amplification)的温度通常为37℃。

Bsu DNA Polymerase, Large Fragment是将枯草芽孢杆菌DNA聚合酶I的5'→3'核酸外切酶结构域(1-296 aa)删除后表达剩余蛋白序列而获得的。该酶保留了枯草芽孢杆菌DNA 聚合酶I的5'→3'聚合酶活性，但是缺失了5'→3'核酸外切酶和3'→5'核酸外切酶活性。

重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)主要包括以下几个组分：重组酶(recombinase) T4 UvsX，重组酶载入因子(recombinase loading factor) T4 UvsY，Bsu DNA聚合酶大片段以及单链DNA结合蛋白(single-strand binding protein)T4 gp32。在ATP存在的情况下，UvsX与引物相结合，扫描DNA模板，寻找到与引物配对的核酸序列，一旦引物被定位到了DNA模板的同源序列，ATP水解产生ADP，ADP与UvsX的结合导致UvsX被gp32取代而从DNA模板上解离下来，gp32作为单链结合蛋白可以稳定被置换的DNA链的结构，Bsu DNA聚合酶大片段因引物与DNA模板的配对而进行引物的延伸和模板的扩增。重组酶载入因子T4 UvsY和拥挤试剂(crowding reagent) Carbowax20M的加入有利于UvsX与引物的结合，即有利于重组酶UvsX的载入。

碧云天生产的Bsu DNA Polymerase, Large Fragment催化延伸DNA模板的效果请参考图1。

图1.碧云天生产的Bsu DNA Polymerase, Large Fragment催化延伸DNA模板的效果图。使用本产品或竞争(Competitor) N公司的Bsu DNA Polymerase, Large Fragment，在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的Bsu DNA Polymerase, Large Fragment，37℃孵育15min进行反应。反应完毕后冰浴3-5min，75℃孵育20min以终止反应。取出5μl反应液，加入1μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(180V电泳60min)；之后用Gel-Red (D0140)室温染色15min，然后进行拍照记录。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20μl)：10mM Tris-HCl (pH7.9 at 25℃), 50mM NaCl, 10mM MgCl₂, 1mM DTT, 125µM dNTP Mix, 0.5µM Template/Primer (Template: 5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3 / Primer: 5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3')；Primer和Template按照D0251产品说明书中推荐的程序进行退火反应，之后以Primer/Template退火产物为底物，进行DNA模板的延伸。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

用途：RPA法等温扩增；RPA链置换的DNA合成；随机引物法标记；cDNA第二条链合成；单个dA的加尾。

来源：大肠杆菌表达枯草芽孢杆菌DNA聚合酶I基因(297-880 aa)获得的重组蛋白。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate10 nmol dNTPs into acid insoluble material in 30 minutes at 37℃.

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含核糖核酸酶。

酶储存液：25 mM Tris-HCl (pH7.4), 50 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol.

10XReaction Buffer: 100 mM Tris-HCl (pH7.9 at 25℃), 500 mM NaCl, 100 mM MgCl₂, 10 mM DTT.

失活或抑制：75℃孵育20min。

-20℃保存。

由于缺乏3'→5'核酸外切酶活性，Bsu DNA Polymerase, Large Fragment不能切除3'未配对的突出末端，因而不适用于产生平末端。

Bsu DNA Polymerase, Large Fragment 25℃时仍保留50%的DNA聚合酶活性，是相同温度下Klenow片段(3'→5' exo-)活力的两倍。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。