碧云天生产的T4 RNA Ligase 2, truncated (T4 Rnl2, truncated或Rnl2 (1-249))，即T4 RNA连接酶2截短型，该酶仅包含T4 RNA连接酶2 N端249个氨基酸，可特异性地将5'端预腺苷酰化的DNA或RNA (App-DNA或App-RNA)连接到RNA的3'羟基。

T4 RNA Ligase 2, truncated与T4 RNA Ligase 2的酶活性完全不同，后者是一种ATP依赖的dsRNA ligase，而前者是一种不依赖于ATP的，依赖于5'端预腺苷酰化的单链核酸连接酶。

T4 RNA Ligase 2, truncated常用于microRNA (miRNA)等3'端为羟基的单链RNA在克隆、高通量测序建库或PCR检测等时，在3'羟基端添加5'端预腺苷酰化的DNA或RNA接头。

T4 RNA Ligase 2, truncated只能利用5'端预腺苷酰化的单链DNA或RNA作为3'端接头，因此可以大大降低连接反应的背景，通常是小RNA等建库时的优先选择。

T4 RNA Ligase 2, truncated连接时不需要ATP，但需要5'端预腺苷酰化(也称预腺苷化、腺苷酰化或腺苷化)底物。即使在有ATP存在的情况下，T4 RNA Ligase 2, truncated也不能催化连接单链DNA或RNA 5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键。而T4 RNA Ligase 1可以在ATP存在的情况下，催化连接单链DNA或RNA 5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键。因此T4 RNA Ligase 2, truncated特别适用于small RNA library的制备，不管是进行miRNA的测序还是进行directional mRNA-Seq，该酶都可以提高建库的质量，并有效降低连接反应的背景。

碧云天生产的T4 RNA Ligase 2, truncated催化连接AppDNA和ssRNA的效果请参见图1。

图1. 碧云天生产的T4 RNA Ligase 2, truncated和N公司的同类产品(Competitor T4 RNA Ligase 2, truncated)催化连接AppDNA和ssRNA的效果图。使用本产品或国外N公司的T4 RNA Ligase 2, truncated，即T4 Rnl2(1-249)，在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的T4 Rnl2, truncated，25℃孵育60 min进行连接反应，反应完毕后立即取样在65℃孵育20 min终止反应，加入变性上样缓冲液，在95℃孵育5 min后放至冰浴中，随后用15%尿素(7M)变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分析，最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。

用途：5'末端预腺苷酰化的单链DNA或者RNA与单链RNA的3'羟基末端连接；cDNA文库构建中连接5'末端预腺苷酰化单链寡核苷酸和小RNA；链特异性的cDNA文库(strand-specific cDNA library)构建中连接5'末端预腺苷酰化单链寡核苷酸和RNA；二代测序中，miRNA文库构建中RNA的3'末端与接头之间的连接；cDNA文库的构建以进行小RNA转录组分析(small-RNA transcriptome analysis)。

来源：大肠杆菌表达的重组蛋白，表达基因为T4嗜菌体T4 RNA ligase 2 N端1-249位的氨基酸。

活性单位定义:200 units is defined as the amount of enzyme required to give 80% ligation of a 31-mer RNA to the pre-adenylated end of a 17-mer DNA (Universal miRNA Cloning Linker, Beyotime, Cat. No. R0702) in a total reaction volume of 10 µl in 1 hour at 25℃.

纯度：无DNA内切酶和外切酶活性，无RNA酶活性，无蛋白酶活性。

酶储存溶液：10 mM Tris-HCl (pH7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 0.1 mM DTT, 50% (v/v) Glycerol.

失活或抑制：65℃加热20 min可使T4 RNA Ligase 2, truncated失活，或加入蛋白酶K或EDTA也可以抑制其活性。

-20℃保存，至少一年有效。

本产品提供的试剂均用不含DNA酶和RNA酶的水配制，可直接用于3'端为羟基的单链RNA和5'端腺苷酰化的DNA或RNA之间的连接反应。

可根据具体应用选择合适的操作方法，可能需准备额外的试剂，如碧云天生产的R0102 RNase inhibitor、R0022 DEPC水等。

使用本产品连接ssRNA和AppDNA时，建议使用的PEG8000的浓度为10%-30%，适当提高PEG8000的浓度，会显著提高T4 Rnl2, truncated的催化的连接效率，而不改变其反应特性。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。