SP6 RNA Polymerase，即SP6 RNA聚合酶，是一种高度特异识别SP6启动子序列的DNA依赖的5'→3' RNA聚合酶。SP6 RNA Polymerase可以催化单链或双链DNA SP6 启动子下游NTP的掺入，合成与SP6启动子下游的模板DNA互补的RNA。

特点：SP6 RNA Polymerase不仅可以进行常规的RNA合成，还可以识别修饰的NTP，例如生物素标记、地高辛标记、荧光素标记的NTP，可以用于各种标记RNA的合成。同时对于SP6启动子有高度的特异性。

碧云天生产的SP6 RNA Polymerase以带有SP6 Promoter的线性化质粒DNA为模板进行转录时的效果参见图1。

图1. 碧云天生产的SP6 RNA Polymerase与国外N公司同类产品(Competitor)以带有SP6 Promoter的线性化质粒DNA为模板进行体外转录时的效果图。在20µl反应体系(40mM Tris-HCl pH7.9, 2mM Spermidine, 6mM MgCl₂, 1mM DTT)中，加入0.2μg线性化质粒DNA，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的SP6 RNA Polymerase，37℃孵育2h，70℃孵育10min终止反应，加入2U DNase I (D7073)，37℃孵育15min消化模板DNA，得到的RNA转录产物为198nt。取出5μl反应产物，加入5μl 2X RNA Loading Buffer，70℃变性10min，然后进行1%琼脂糖凝胶电泳，用1X TAE作为电泳液，150V电泳10min，染色后拍照观察结果。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有相近或略优的转录效果。

用途：用于RNA合成，合成的RNA可以用于或用作：杂交探针，基因组DNA序列分析，核糖核酸酶保护测定(RNase protection assay)，反义RNA合成，作为体外翻译的RNA模板，RNA剪接研究的底物，RNA二级结构和RNA-蛋白质相互作用，核酸扩增分析，siRNA、miRNA等小RNA。

来源：由大肠杆菌表达，表达基因为嗜菌体SP6 RNA Polymerase基因。

活性定义： 37℃ 60分钟内，催化1 nmol AMP掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。

活性检测条件：40mM Tris-HCl (pH8.0)，6mM MgCl₂，10mM DTT，2mM spermidine，0.5mM NTP，0.6MBq/ml [³H]-ATP，20µg/ml plasmid DNA containing the specific SP6 RNA Polymerase promoter sequence。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。

酶储存溶液：50mM Tris-HCl (pH7.9, 25℃), 100mM NaCl, 5mM DTT, 1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100.

Transcription Buffer (10X)：400mM Tris-HCl (pH7.9, 25℃), 20mM spermidine, 60mM MgCl₂, 10mM DTT.

失活或抑制：70℃加热10分钟可使SP6 RNA Polymerase失活。加入适量EDTA也可以使SP6 RNA Polymerase失活。螯合剂、浓度大于150mM的钠、钾或铵盐可以显著抑制SP6 RNA Polymerase的活性。

SP6 consensus promoter sequence如下，其中的G为转录的第一个碱基。

ATTTAGGTGACACTATAGAAGNG

-20℃保存。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。