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碧云天 Thermostable RNase H(耐热RNase H)(R7090L)

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  • 商品名称:碧云天 Thermostable RNase H(耐热RNase H)(R7090L)
  • 商品编号:R7090L
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2022-08-26
  • 商品毛重:100克
  • 库存: 30
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碧云天生产的Thermostable RNase H,即耐热RNase H,是一种在较高温度(65℃以上)时仍然保持活性的核糖核酸内切酶(endoribonuclease)。Thermostable RNase H可以选择性识别并酶切RNA:DNA杂合双链中的RNA的磷酸二酯键,同时杂合双链中的DNA会保持完整。Thermostable RNase H不会降解单链或双链的RNA或DNA。

Thermostable RNase H在65℃以上温度时仍具有很高的酶活性,其在70℃时的半衰期可达几个小时,在高达95℃时的半衰期仍可达30分钟左右。 该酶的耐高温特性使得异源双链RNA:DNA杂交分子具有更高的特异性,并在较高温度下更特异性地降解杂合双链中的RNA。Thermostable RNase H具有与常见的E. coli RNase H具有类似的酶学性质,但E. coli RNase H在高于55℃时即失活。

Thermostable RNase H与E. coli RNase H的热稳定性比较请参考图1。


图1. 碧云天生产的R7090 Thermostable RNase H与E. coli RNase H的热稳定性比较。在20µl反应体系中加入图中指定量的Thermostable RNase H或E. coli RNase H,在65℃孵育20min后,Thermostable RNase H和E. coli RNase H分别按照其标准的反应条件(Thermostable RNase H 50℃孵育20min;E. coli RNase H 37℃孵育20min)进行RNA:DNA杂交链的酶切反应,反应完毕后立即冰浴3-5分钟并加入1μl 0.5M EDTA终止反应。取出5μl反应液,加入1μl 6×DNA Loading Buffer,然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(冰浴条件下180V电泳45min;之后用NA-Red (D0128    NA-Red (EB升级换代产品, 2000X))室温染色15min,即可拍照观察结果)。如图所示,E. coli RNase H在65℃时失去活性,而Thermostable RNase H在65℃时仍保持活性。热稳定性比较反应体系(20μl):Thermostable RNase H:50mM Tris-HCl (pH 8.3), 75mM KCl, 3mM MgCl2, 10mM DTT, 400ng RNA:DNA杂合双链以及不同量的Thermostable RNase H (包括未经热处理和在65℃孵育20min热处理),50℃孵育20min;E. coli RNase H:20mM Tris-HCl (pH 7.8), 40mM KCl, 8mM MgCl2, 1mM DTT, 400ng RNA:DNA杂合双链以及不同量的E. coli RNase H (包括未经热处理和在65℃孵育20min热处理),37℃孵育20min。

碧云天生产的Thermostable RNase H催化降解RNA:DNA杂合双链中的RNA链的效果请参考图2:


图2. 碧云天生产的R7090 Thermostable RNase H和竞争公司的同类产品的效果比较图。使用本产品或N公司(Competitor)的Thermostable RNase H,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的Thermostable RNase H,50℃孵育20min进行反应,反应完毕后立即冰浴3-5分钟并加入1μl 0.5M EDTA以终止反应。取出5μl反应液,加入1μl 6×DNA Loading Buffer,然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(冰浴条件下180V电泳45min;之后用NA-Red (D0128    NA-Red (EB升级换代产品, 2000X))室温染色15min,即可拍照观察结果)。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的催化效果。RNA:DNA杂合双链反应体系(20μl):50mM Tris-HCl (pH 8.3), 75mM KCl, 3mM MgCl2, 10mM DTT, 400ng RNA:DNA杂合双链以及不同量的Thermostable RNase H,50℃孵育20min。

用途:高严谨度的RNA结构图谱的描绘和位点特异性RNA切割;与oligo (dT)杂交的mRNA的poly (A)尾的酶切去除;cDNA合成后去除mRNA;用于等温扩增实验;用于和特定DNA序列杂交后酶切去除特定的RNA序列,例如rRNA的去除等。

来源:大肠杆菌表达的重组蛋白。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1 nmol of ribonucleotides from 40 pmol of a fluorescently labeled 25 base pair RNA:DNA hybrid in a total reaction volume of 50 µl in 20 minutes at 50℃。

纯度:纯度大于95%,不含DNA内切酶和外切酶,不含其它核糖核酸酶。

酶储存溶液:50mM Tris-HCl (pH7.5), 100mM NaCl, 1mM  DTT, 0.1mM EDTA, 0.1% Triton® X-100, 50% (v/v) Glycerol。

10XReaction Buffer:500mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25℃), 750mM KCl, 30mM MgCl2, 100mM DTT。

失活或抑制:加入适量蛋白酶K消化或加入5%体积的0.5M EDTA pH8.0。

保存条件:

-20℃保存,至少一年有效。

注意事项:

本产品的最佳反应温度高于65℃,在95℃时仍具有活性,其在65℃时的活性是在37℃时的3-4倍。

本产品在使用说明中建议的反应温度是50℃,在实际实验操作中可以酌情通过提高反应温度提高其酶活性。

本产品的反应缓冲液中包含MgCl2,当Thermostable RNase H在高温时应用于RNA/DNA杂交链或者RNA样品时,建议适当限制反应时间和温度,以减少金属介导的单链RNA降解。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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