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碧云天 超快速DNA连接试剂盒(Instant DNA Ligation Kit)(D7001M)

DNA连接

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  • 商品名称:碧云天 超快速DNA连接试剂盒(Instant DNA Ligation Kit)(D7001M)
  • 商品编号:D7001M
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2022-08-26
  • 商品毛重:10克
  • 库存: 65535
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7001S 超快速DNA连接试剂盒 100次 248.00元
D7001M 超快速DNA连接试剂盒 500次 968.00元

超快速DNA连接试剂盒(Instant DNA Ligation Kit),也被称为瞬时DNA连接试剂盒或即时DNA连接试剂盒,是碧云天研发的一种把粘末端或平末端DNA片段在室温(20-25℃)短至0-1分钟内快速插入到载体(Vector)中的连接试剂盒。同时本试剂盒也可以用于其它各种常规的双链DNA连接反应。

本试剂盒可以用于PCR片段和载体的连接、酶切产物和载体的连接、linker和载体的连接、linker和linker的连接等各种双链DNA的连接。

为了获得快速高效的连接效果,本试剂盒采用了一种特殊的高活力Instant T4 DNA Ligase以及相应的Instant Ligation Buffer。通常连接0-1分钟和连接60min的效果相近。本试剂盒用于双平端片段插入到pUC18载体的连接,后续转化DH5α感受态细胞后涂板获得的LB平板的实测效果参考图1A,菌落PCR鉴定结果参考图1B。

图1. 碧云天超快速DNA连接试剂盒(D7001)用于平末端DNA连接的效果图。本试剂盒用于平末端片段插入到载体的连接,随后转化涂板的效果见图A。在20µl反应体系中,将SmaI单酶切线性化并用D7028 Antarctic Phosphatase (Thermosensitive)去除末端磷酸根的载体pUC18与PCR扩增的1100bp双平端DNA片段混合(载体与DNA片段的摩尔比为1:3),然后加入4µl的5X Instant Ligation Buffer,1µl Instant T4 DNA Ligase,并用水补足至20µl,室温反应0min、1min、5min、60min。然后取10µl转化到100µl的DH5α感受态细胞中,随后涂板。如图所示,连接0、1、5或60min后转化后得到的克隆数相近。菌落PCR鉴定使用本试剂盒连接获得的克隆效果见图B。菌落PCR引物为M13 forward sequencing primer (5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3')和M13 reverse sequencing primer (5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3')。如图所示,0min连接阳性率可达100%,连接时间越长,阳性率略有减少趋势,连接60min后,阳性率达60%。实际检测效果会因实验条件的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

在确保连接效果的同时,确保完成连接后不必进行任何纯化即可直接转化细菌。另外,Instant Ligation Buffer中已经含有ATP、镁离子等各种必需物质,无需再添加其它任何试剂。

本试剂盒用于总体积为10µl的连接体系时,小包装和中包装分别可以进行100个和500个连接反应;用于总体积为20µl的连接体系时,小包装和中包装分别可以进行50个和250个连接反应。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7001S-1 Instant Ligation Buffer (5X) 250µl
D7001S-2 Instant T4 DNA Ligase 50µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7001M-1 Instant Ligation Buffer (5X) 1.25ml
D7001M-2 Instant T4 DNA Ligase 250µl
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,至少一年有效。

注意事项:

连接反应完成后即可直接转化细菌,请勿加热失活Instant T4 DNA Ligase。加热处理会导致后续的转化效率显著下降。

对于载体单酶切插入外源片段的情况,需注意对载体使用磷酸酶,如D7028 Antarctic Phosphatase (Thermosensitive)D7027 BeyoAP Alkaline Phosphatase进行脱磷处理,以避免质粒自连。

Instant Ligation Buffer (5X)使用前一定要完全溶解并混匀,加入到连接体系后也须注意混匀。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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