碧云天研发的Instant T4 DNA Ligase，即超快速T4 DNA连接酶，是T4 DNA连接酶的升级版本，可以快速高效催化粘端或平端双链DNA或RNA的5'-P末端和3'-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时Instant T4 DNA Ligase可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合双链中的单链缺刻(single-strand nicks)。

用途：Instant T4 DNA Ligase常用于DNA片段和载体、linker或adaptor等的连接。也可用于缺刻修复及Ligase介导的RNA检测。

来源：本Instant T4 DNA Ligase由大肠杆菌表达，表达基因为T4嗜菌体T4 DNA Ligase基因的突变体。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of λ DNA in 30min at 16℃ in 20µl of the assay mixture containing 50mM Tris, pH7.5, 10mM MgCl₂, 10mM DTT, 1mM ATP, 25µg/ml BSA and a 5'-DNA termini concentration of 0.12µM (300µg/ml)。200U等于1个Weiss unit，以Weiss unit计，本产品的包装分别为200U和1000U。

图1. 碧云天Instant T4 DNA Ligase (D7009)和T4 DNA Ligase (D7006/D7008)的平末端连接实测效果图。如图所示，左侧为将Instant T4 DNA Ligase和T4 DNA Ligase分别用于平端连接后转化DH5α感受态细胞后涂板获得的LB平板的实测效果图，右侧为菌落PCR鉴定的结果。在20µl反应体系中，将SmaI单酶切线性化并用D7028 Antarctic Phosphatase (Thermosensitive)去除末端磷酸根的载体pUC18，与PCR扩增的1100bp双平端DNA片段混合(载体与DNA片段的摩尔比为1:3)，然后加入2µl的10X Ligation Buffer, 0.5µl的Instant T4 DNA Ligase或T4 DNA Ligase，并用水补足至20µl，分别在16℃孵育1h后，取10µl转化到100µl的DH5α感受态细胞中。实验结果表明，Instant T4 DNA Ligase连接1小时得到的克隆数相当，Instant T4 DNA Ligase连接1h的阳性率可达100%，而T4 DNA Ligase连接1h的阳性率约为60%。菌落PCR引物为M13 forward sequencing primer (5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3')和M13 reverse sequencing primer (5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3')。实际检测效果会因实验条件的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规连接反应要求。

酶储存溶液：20mM Tris, pH7.5, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA and 50% (v/v) glycerol。

10X Ligation Buffer：400mM Tris, pH7.8, 100mM MgCl₂, 100mM DTT, 10mM ATP。

失活或抑制：65℃孵育10min可以导致Instant T4 DNA Ligase失活；NaCl或KCl浓度大于200mM时会强烈抑制Instant T4 DNA Ligase。

-20℃保存，至少一年有效。

对于普通的转化大肠杆菌的操作，不必对连接产物进行纯化，连接产物可以直接用于转化。但用电转方法转化大肠杆菌时，通常宜先用DNA纯化试剂盒或酚氯仿抽提方法等纯化DNA，然后再进行电转。

需快速连接时，推荐使用碧云天的超快速DNA连接试剂盒(D7001)或快速DNA连接试剂盒(D7002/D7003)。

普通连接反应不必进行凝胶电泳观察。如果需要对于连接产物进行凝胶电泳观察，推荐先在65℃孵育10min使Instant T4 DNA Ligase失活，以避免Instant T4 DNA Ligase和DNA结合导致的条带位置迁移(Band shift)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。