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碧云天 Instant T4 DNA Ligase (超快速T4 DNA连接酶)(D7009M)

DNA连接

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  • 商品名称:碧云天 Instant T4 DNA Ligase (超快速T4 DNA连接酶)(D7009M)
  • 商品编号:D7009M
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2022-08-26
  • 商品毛重:10克
  • 库存: 65535
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7009S Instant T4 DNA Ligase 40kU 69.00元
D7009M Instant T4 DNA Ligase 200kU 268.00元

碧云天研发的Instant T4 DNA Ligase,即超快速T4 DNA连接酶,是T4 DNA连接酶的升级版本,可以快速高效催化粘端或平端双链DNA或RNA的5'-P末端和3'-OH末端之间以磷酸二酯键结合,该催化反应需ATP作为辅助因子。同时Instant T4 DNA Ligase可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合双链中的单链缺刻(single-strand nicks)。

用途:Instant T4 DNA Ligase常用于DNA片段和载体、linker或adaptor等的连接。也可用于缺刻修复及Ligase介导的RNA检测。

来源:本Instant T4 DNA Ligase由大肠杆菌表达,表达基因为T4嗜菌体T4 DNA Ligase基因的突变体。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of λ DNA in 30min at 16℃ in 20µl of the assay mixture containing 50mM Tris, pH7.5, 10mM MgCl2, 10mM DTT, 1mM ATP, 25µg/ml BSA and a 5'-DNA termini concentration of 0.12µM (300µg/ml)。200U等于1个Weiss unit,以Weiss unit计,本产品的包装分别为200U和1000U。

Instant T4 DNA Ligase和T4 DNA Ligase分别进行平末端连接后,连接产物转化感受态细胞后涂板获得的LB平板的实测效果和菌落PCR鉴定结果参考图1。

图1. 碧云天Instant T4 DNA Ligase (D7009)T4 DNA Ligase (D7006/D7008)的平末端连接实测效果图。如图所示,左侧为将Instant T4 DNA Ligase和T4 DNA Ligase分别用于平端连接后转化DH5α感受态细胞后涂板获得的LB平板的实测效果图,右侧为菌落PCR鉴定的结果。在20µl反应体系中,将SmaI单酶切线性化并用D7028 Antarctic Phosphatase (Thermosensitive)去除末端磷酸根的载体pUC18,与PCR扩增的1100bp双平端DNA片段混合(载体与DNA片段的摩尔比为1:3),然后加入2µl的10X Ligation Buffer, 0.5µl的Instant T4 DNA Ligase或T4 DNA Ligase,并用水补足至20µl,分别在16℃孵育1h后,取10µl转化到100µl的DH5α感受态细胞中。实验结果表明,Instant T4 DNA Ligase连接1小时得到的克隆数相当,Instant T4 DNA Ligase连接1h的阳性率可达100%,而T4 DNA Ligase连接1h的阳性率约为60%。菌落PCR引物为M13 forward sequencing primer (5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3')和M13 reverse sequencing primer (5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3')。实际检测效果会因实验条件的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规连接反应要求。

酶储存溶液:20mM Tris, pH7.5, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA and 50% (v/v) glycerol。

10X Ligation Buffer:400mM Tris, pH7.8, 100mM MgCl2, 100mM DTT, 10mM ATP。

失活或抑制:65℃孵育10min可以导致Instant T4 DNA Ligase失活;NaCl或KCl浓度大于200mM时会强烈抑制Instant T4 DNA Ligase。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7009S-1 Instant T4 DNA Ligase (1kU/µl) 40μl
D7009S-2 10X Ligation Buffer 200µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7009M-1 Instant T4 DNA Ligase (1kU/µl) 200μl
D7009M-2 10X Ligation Buffer 1ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,至少一年有效。

注意事项:

对于普通的转化大肠杆菌的操作,不必对连接产物进行纯化,连接产物可以直接用于转化。但用电转方法转化大肠杆菌时,通常宜先用DNA纯化试剂盒或酚氯仿抽提方法等纯化DNA,然后再进行电转。

需快速连接时,推荐使用碧云天的超快速DNA连接试剂盒(D7001)快速DNA连接试剂盒(D7002/D7003)。

普通连接反应不必进行凝胶电泳观察。如果需要对于连接产物进行凝胶电泳观察,推荐先在65℃孵育10min使Instant T4 DNA Ligase失活,以避免Instant T4 DNA Ligase和DNA结合导致的条带位置迁移(Band shift)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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