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碧云天 BeyoFast Probe One-Step qRT-PCR Kit(一步法反转录实时荧光定量PCR预混液)(D7277M)

定量PCR

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  • 商品名称:碧云天 BeyoFast Probe One-Step qRT-PCR Kit(一步法反转录实时荧光定量PCR预混液)(D7277M)
  • 商品编号:D7277M
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2022-08-29
  • 商品毛重:10克
  • 库存: 65535
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7277S BeyoFast™ Probe One-Step qRT-PCR Kit 100次 433.00元
D7277M BeyoFast™ Probe One-Step qRT-PCR Kit 500次 1759.00元

碧云天的BeyoFast™ Probe One-Step qRT-PCR Kit是一种基于TaqMan等探针的用于一步法反转录实时荧光定量PCR,即qRT-PCR(Quantitative Reverse Transcription PCR)或real-time RT-PCR的高品质预混液,主要用于RNA的特异性超高灵敏度定量检测。由于使用的探针一般是TaqMan探针,所以本方法也常称作TaqMan探针法。
BeyoFast™ Probe One-Step qRT-PCR Kit以提取的RNA为模版,使用qPCR引物在同一反应管内连续进行反转录和荧光定量PCR,操作简单快速,最大限度地减少人为误差,有效降低污染风险,节约PCR实验的操作时间,检测通量大。
本产品整合了高效的BeyoRT™ M-MuLV Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor和优异的抗体结合型热启动BeyoFast™ Taq DNA Polymerase,并优化了缓冲体系,反转录性能优、检测灵敏度高、扩增特异性强、反应稳定性好,非常适合于內源低丰度RNA、外源病毒RNA等微量RNA的检测。
检测原理:探针法qPCR不使用荧光染料如SYBR Green等对PCR产物进行荧光染色,而是采用了荧光基团和淬灭基团(quencher)标记的DNA探针靶向拟通过PCR检测的目标序列(设计的探针结合位点通常位于两条引物结合位点之间)。正常情况下,探针上的淬灭基团由于空间上的荧光共振能力转移(FRET)而导致荧光基团淬灭。在PCR反应扩增目标序列时,引物和探针都会退火到目标基因上,随着引物的延伸,Taq酶的5'→3'外切酶活性会导致结合在目标序列上的探针从5’端开始逐渐被降解。探针的荧光基团和淬灭基团被Taq酶切开后,淬灭基团的作用消失,荧光基团就能正常地被激发光所激发而产生荧光了。每经过一个PCR循环,就会有更多的荧光基团被释放,荧光强度与新合成的目标片段数量成正比,从而就可以实现定量检测了。探针通常是目标序列特异性的一段线性DNA,5'端标记FAM或HEX等荧光基团,3'端标记BHQ1、TAMRA或MGB等荧光淬灭基团。
本产品的特异性好、灵敏度高:特异性并不仅仅依赖于PCR引物,探针和目标基因发生特异性的结合和降解,才能生成荧光信号,检测灵敏度和特异性通常要显著高于使用SYBR Green等荧光染料的方法。
本产品可用于多重检测:单个反应孔中,不同基因对应不同探针,不同探针对应不同荧光标记,即可进行多重荧光定量PCR检测。经测试,在适当优化引物和探针后,本产品可同时用于2-3个基因的检测。
本产品使用的BeyoFast™ Taq DNA Polymerase是一种与抗体结合的高品质热启动酶,能够实现便捷高效的热启动。BeyoFast™ Taq DNA Polymerase中的Taq酶与抗Taq酶的单克隆抗体相互结合,从而抑制了Taq酶的DNA聚合酶活性,这样可以有效避免在低温条件下由引物和模板DNA非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。在PCR反应的预变性步骤中抗体会被加热失活,这样可以确保仅在预变性后才会把Taq酶的活性释放出来,预变性之前不会发生DNA聚合反应,从而大大提高了PCR反应的特异性、灵敏度和定量检测的准确性。
本产品包含了BeyoRT™ M-MuLV Reverse Transcriptase、BeyoFast™ Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、稳定剂、Nuclease-free Water、ROX (根据不同荧光定量PCR仪进行选择)和镁离子等所有的通用组分,使操作更简单、使用更便捷。用户只需自备引物、探针和样品RNA即可。
本产品提供了Low ROX和High ROX,广泛兼容于无需ROX和需要Low ROX或High ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。ROX的作用是用于校正与PCR无关的荧光波动,从而最大限度减少孔间差异。这种差异可能由多种因素引起,如移液误差及样品蒸发等。不同的荧光定量PCR仪对ROX的要求不同,请根据实际所用仪器在配制反应体系时选择高浓度ROX (High ROX)、低浓度ROX (Low ROX)或不加ROXProbe。Probe常用仪器所需ROX类型请参考如下表格。

添加ROX类型 适用PCR仪
不需添加 Bio-Rad: CFX384, CFX96, MiniOpticon, iCycler IQ, MyiQ and iQ5;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex and realplex2 s;
Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 6000;
Roche LightCycler 480; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR
Low ROX ABI: 7500(Fast), ViiA 7, QuantStudio 6 and 7 Flex Systems;
Stratagene: Mx3000P, Mx3005P and Mx4000;
Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 3000;
Bio-Rad/MJ: Chromo4, Opticon 2 and Opticon;
High ROX ABI GeneAmp 5700; ABI PRISM 7000, 7700; ABI 7300, 7900HT(Fast); ABI StepOne(Plus)

如果用于常规的96孔板qRT-PCR检测(建议反应体系为20µl),本产品小包装D7277S可以进行100次检测,中包装D7277M可进行500次检测;如果用于常规的384孔板qRT-PCR检测(建议反应体系为10µl),本产品小包装D7277S可以进行200次检测,中包装D7277M可进行1000次检测。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7277S-1 Probe One-Step Enzyme Mix (10X) 200µl
D7277S-2 Probe One-Step Reaction Buffer (2X) 1ml
D7277S-3 Nuclease-free Water 1ml
D7277S-4 Low ROX (50X) 40µl
D7277S-5 High ROX (50X) 40µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7277M-1 Probe One-Step Enzyme Mix (10X) 1ml
D7277M-2 Probe One-Step Reaction Buffer (2X) 5ml
D7277M-3 Nuclease-free Water 5ml
D7277M-4 Low ROX (50X) 200µl
D7277M-5 High ROX (50X) 200µl
说明书 1份

保存条件:
-20℃避光保存,两年有效。尽量避免反复冻融。
注意事项:
探针的荧光标记须根据所使用的qPCR仪荧光兼容性来确定。对于需要ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪,避免使用ROX标记探针。
用于多重检测时,需要适当优化引物和探针,并使用适当的不同荧光基团标记探针,确定效果后再进行多重检测,一般建议不超过三重检测。
请注意避免RNase污染,使用RNase-free的枪头、离心管等。
Probe One-Step Enzyme Mix (10X)含有高浓度甘油,粘度高,使用前将短暂离心至管底,并用移液器轻轻混匀,混匀过程中尽量避免产生气泡,然后缓慢准确吸取。
使用前需确保Probe One-Step Reaction Buffer (2X)完全融化,上下颠倒轻轻混匀后使用。
如果扩增片段较长或者RNA结构较为复杂,可将模板RNA在65℃预处理5-10分钟,可提高反转录效率。
本反应使用qPCR的Reverse Primer作为反转录的基因特异性引物,不能使用Random Hexamer Primer或Oligo(dT) Primer等常用于cDNA第一链合成的引物。
注意引物退火温度,当退火温度<60℃时,推荐使用三步法PCR扩增。
对于超过350bp或者高GC含量的扩增片段,建议增加延伸时间至60秒或者采用三步法以提高扩增效率。
经测试,本产品反复冻融10次对使用效果无显著影响。但仍需尽量避免反复冻融本产品,反复冻融可能使产品性能下降。
qPCR检测是超高灵敏度的检测,PCR反应设置区域需尽量避免各种可能的待扩增产物的污染。PCR产物宜密封后丢弃,以避免超高浓度的PCR产物污染实验环境。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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