碧云天生产的Poly(A) Polymerase Tailing Kit，即Poly(A)聚合酶加尾试剂盒，是一种基于E.coli Poly(A) Polymerase的活性在ATP存在的情况下将Poly(A)尾快速而有效地添加到单链RNA的3'-OH末端的试剂盒。

如果RNA分子的3’末端是磷酸，可以使用T4 Polynucleotide Kinase (T4 PNK)，即T4多核苷酸激酶，在没有ATP存在的情况下催化去除3’端磷酸。在加Poly(A)尾之前，可以通过柱纯化(如R0028 RNAeasy™动物小RNA抽提试剂盒)或切胶回收等方法去除T4 PNK及相应的反应体系组分。

Poly(A) Polymerase Tailing Kit主要用于在RNA分子3'末端添加≥150个碱基的Poly(A)尾。Poly(A)尾的添加可提高RNA在真核细胞中的稳定性并增强其在转染或显微注射后的翻译效率。此外，Poly(A)尾还可以为合成cDNA时提供通用的引物结合位点，或用于RNA的末端标记或mRNA的定量。

碧云天Poly(A) Polymerase Tailing Kit对单链RNA添加Poly(A)尾的效果请参考图1。

图1. 碧云天Poly(A) Polymerase Tailing Kit对单链RNA添加Poly(A)尾的效果图。在100µl反应体系(50mM Tris-HCl, pH8.1, 250mM NaCl, 1mM ATP, 10mM MgCl₂)中，加入人工合成的1µg 22nt的单链RNA，以及图中指定量的Poly(A) Polymerase，37℃孵育60min，65℃孵育20min终止反应。取20μl反应后的产物，加入4μl 6X DNA Loading Buffer (D0071)，95℃变性3min。随后进行含7M Urea的15%聚丙烯酰胺凝胶电泳。室温条件下用1X TBE作为电泳液，180V电泳90min，NA-Red (D0128) 1:1000稀释后室温染色15min，然后拍照观察。

用途：提高mRNA在真核细胞中的稳定性，提高转染或显微注射后真核细胞中RNA的翻译效率；在合成cDNA第一链时，提供引物结合位点；将放射性标记的腺苷(radiolabled adenosine)添加到RNA分子的3’末端。

本试剂盒如果用于100μl的反应体系，可以进行50次Poly(A)加尾反应；本试剂盒如果用于20μl的反应体系，可以进行250次Poly(A)加尾反应。

-20℃保存，至少两年有效。

反应的终止取决于加Poly(A)尾后RNA分子的后续用途。可以有多种方式终止Poly(A)加尾反应，如立即将完成的反应置于-20℃或-80℃条件下冷冻，通过有机溶剂萃取(例如苯酚/氯仿抽提)去除Poly(A) Polymerase或使用EDTA等试剂螯合Mg²⁺以抑制酶活性。使用本试剂盒时，不推荐对Poly(A) Polymerase进行热变性以终止反应，因为这样可能会导致RNA降解。

如果需要在体外或体内进行翻译，可以预先通过苯酚/氯仿抽提及乙醇或醋酸铵沉淀，或柱纯化已经添加了Poly(A)尾的RNA。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。