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碧云天 Q6U High-Fidelity DNA Polymerase(Q6U 高保真DNA聚合酶)(D7239L)

建库与高通量测序

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市场价¥2795
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  • 商品名称:碧云天 Q6U High-Fidelity DNA Polymerase(Q6U 高保真DNA聚合酶)(D7239L)
  • 商品编号:D7239L
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2022-08-29
  • 商品毛重:10.100千克
  • 库存: 65535
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7239S Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase 100U 205.00元
D7239M Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase 500U 845.00元
D7239L Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase 2000U 2795.00元

碧云天生产的Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase,即Q6U™高保真DNA聚合酶,是碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组酶。它是一种以嗜热古细菌DNA聚合酶为基础通过突变等改造其“尿嘧啶结合口袋”而获得的能识别和扩增含有尿嘧啶(uracil)和次黄嘌呤(hypoxanthine)的模板DNA的超高性能DNA聚合酶,因此它除了具有扩增速度快、保真度极高、扩增片段可以轻松达到12kb等优点之外,还可以利用dUTP (2'-deoxy-uridine 5'-triphosphate)和dITP (2'-deoxy-inosine-5'-triphosphate)进行基因扩增,其扩增效果请参考图1和图2。

碧云天的Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase和NEB公司的Q5U™ HotStart High-Fidelity DNA Polymerase、Thermo公司的Phusion U Hot Start DNA Polymerase、Roche公司的KAPA HiFi HotStart Uracil+ Ready Mix (2X)有非常类似的扩增效果和用途。

Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase用于二代测序建库相关扩增时,具有扩增效率极高,低GC偏好性(low GC bias)等优良特性,特别适合用于亚硫酸处理的(bisulfite-converted)、脱氨基的(deaminated)或甲醛固定石蜡包埋(formalin fixation and paraffin embedding, FFPE)等导致的损伤的(damaged) DNA样品的扩增,以及PCR扩增时可以掺入dUTP并和尿嘧啶-N-糖基化酶(uracil-N-glycosylase, UNG)处理相结合可以有效避免PCR扩增产物污染导致的假阳性。DNA长期保存会出现随机的Cytocine脱氨基现象,导致普通的DNA聚合酶无法扩增,而本产品可以兼容并扩增脱氨基的DNA[1-3]

Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase是一种高保真DNA聚合酶,它不仅可以非常高效地催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的聚合酶活性,同时还具有3'至5'的外切酶活性(proofreading activity),它的错误发生概率比Taq酶低40-50倍,其扩增产物为平端(blunt end),因此不能直接进行T载体克隆连接。如需用于T载体克隆,需在其扩增结束后加入常规量的普通Taq酶在72℃反应5-10分钟,使每条链的3'端加上一个A以形成粘端。

图1. 碧云天生产的Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase (简称Q6U™)和BeyoFusion™ DNA Polymerase (简称BeyoFusion)使用dUTP或dITP为底物扩增约1.2kbDNA片段的效果对比图。dUTP组的反应体系为50μl:5μl 10X Q6U™ Buffer或10X BeyoFusion™ Buffer,2μl Primers (10μM each),5μl DdNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM) (D7376),1μl模板质粒(20ng/μl),36μl Nuclease-free Water,冰上混合后加入1μl Q6U™或BeyoFusion™。dITP组的反应体系为50μl:5μl 10X Q6U™ Buffer或10X BeyoFusion™ Buffer,2μl Primers (10μM each),5μl dNTP/dITP Mixture (2.5mM each + 0.25mM dITP),1μl模板质粒(20ng/μl),36μl Nuclease-free Water,冰上混合后加入1μl Q6U™或BeyoFusion™。按照说明书推荐的PCR程序反应完毕后,加入10μl DNA上样缓冲液(6X) (D0071),取5μl使用1%琼脂糖凝胶电泳检测其扩增效果。参考上图,Q6U™ DNA Polymerase可以高效利用dUTP和dITP为底物扩增目的片段,而BeyoFusion™ DNA Polymerase则完全不能。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

图2. 碧云天Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase (简称Q6U)与N公司生产的同类产品(Competitor)利用dUTP和dITP扩增目的片段(约1.2kb)的效果对比图。Q6U使用图1中的反应体系,N公司产品使用其产品说明书推荐的反应体系,酶的用量为图中所标示的用量,U为活力单位。参考上图,碧云天Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase能很好地使用dUTP和dITP进行扩增,并且其扩增效果略优于国外N公司的同类产品。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

来源:Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase通过大肠杆菌重组、表达、纯化而获得。

用途:常规的DNA高效高保真扩增,特别适用于扩增亚硫酸处理的(bisulfite-converted)DNA样品用于DNA甲基化测序,特别适用于扩增脱氨基的(deaminated)或甲醛固定石蜡包埋(formalin fixation and paraffin embedding, FFPE)等导致的损伤的(damaged) DNA样品的扩增,以及PCR扩增时可以掺入dUTP并和尿嘧啶-N-糖基化酶(uracil-N-glycosylase, UNG)处理相结合可以有效避免PCR扩增产物污染导致的假阳性。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 74℃。

纯度:不含DNA内切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶。

酶储存溶液:40mM Tris-HCl (pH7.5), 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 300µg/ml BSA and 50% (v/v) glycerol。

失活或抑制:酚氯仿抽提可以使Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase失活。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7239S-1 Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase (2U/µl) 50μl
D7239S-2 10X Q6U™ Buffer 500μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7239M-1 Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase (2U/µl) 250μl
D7239M-2 10X Q6U™ Buffer 2.5ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7239L-1 Q6U™ High-Fidelity DNA Polymerase (2U/µl) 1ml
D7239L-2 10X Q6U™ Buffer 10ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,至少2年有效。

注意事项:

PCR反应非常灵敏,在进行扩增反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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