碧云天生产的BeyoMulti™ Multiplex PCR Kit，即BeyoMulti™多重PCR试剂盒，是一种高效、高特异性和高灵敏度的适用于对多个(可以超过20个)目标DNA片段同时进行非常均衡的PCR扩增的试剂盒。并且本产品不仅可以用于普通的多重PCR，更可以用于全血、血清或植物样品的直接PCR，便于直接用于血液样品中细菌和病毒感染、基因突变等的多重PCR检测，或者用于植物样品的基因突变、微生物感染等的多重PCR检测。

多重PCR是一种通过单个PCR反应同时对至少两个或多个DNA片段进行扩增的PCR技术。目前该技术已被广泛应用于科学研究、疾病诊断和法庭或诊断性的基因分型(Genotyping)等多个领域。该技术还可以被用于以cDNA为模板的基因定量或半定量的表达分析，其特别适合于各种动植物、真菌、细菌或病毒等微量样品进行多基因检测，具备高特异性和高灵敏度的突出优点。

本产品多重扩增性能优越。本试剂盒实测可以轻松实现15个目标DNA片段的同时并且非常均衡的高效、高特异性和高灵敏度扩增(参考图1)。对于低至1pg的模板量，也可以通过仅30个PCR循环而被很好地扩增(参考图1)。普通的PCR试剂盒会由于PCR扩增时引物和模板的偏好性，对于不同的引物和不同的模板会产生不同的扩增效率，导致部分片段容易被扩增，而部分片段较难被扩增。本试剂盒使用了通过精心筛选和突变优化的非常适合用于多重PCR的DNA聚合酶BeyoMulti™ DNA polymerase和反复优化的配套缓冲液，确保可以实现多个目标DNA片段的高效、高特异性和高灵敏度的均衡扩增。

图1. 碧云天生产的BeyoMulti™ Multiplex PCR Kit进行多重PCR扩增的实测电泳效果图。以图中指定量的Lambda噬菌体基因组DNA为模板，按照本试剂盒的使用说明每个样品采用20μl PCR扩增体系，使用15对引物进行多重PCR扩增，每条引物的终浓度为0.2μM，PCR扩增条件为：94℃预变性5min；94℃变性30sec、60℃退火30sec、68℃延伸3min；最后68℃延伸10min；共30个PCR循环。PCR结束后，取2μl扩增产物进行电泳检测。扩增的片段从小到大依次为113bp、143bp、199bp、253bp、303bp、406bp、501bp、576bp、710bp、802bp、903bp、989bp、1167bp、1300bp和1463bp。M, DNA marker (D0107 DNA Ladder (0.1-10kb, 21 bands))。图中可见低至10pg的模板就可以扩增获得15条非常单一明亮的条带，低至1pg的模板量也能扩增获得比较清晰的15条条带。同时可以观察到在模板量较低、PCR反应不完全的情况下，在100bp条带下方有过剩的引物条带存在。

本产品兼容血液和植物样品。全血或血清样品无须进行DNA的提取和纯化，即可直接作为模板用于本试剂盒的多重PCR检测。本产品适用于EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝血样品或干血斑样品。植物样品也可以直接用于本试剂盒的多重PCR检测，完全无须对植物样品进行DNA的提取和纯化。

本产品提供了阳性对照，便于验证本产品的效果。本试剂盒提供了Control template and primer mix，预先混合了模板和引物，可以作为阳性对照用于验证确认本产品的多重PCR扩增效果。Control template and primer mix中包含了15对引物，可以扩增出如图1所示的从113bp-1463bp的共15个条带。

本产品的扩增产物可以用于TA克隆。使用本产品获得的PCR产物带有3'-dA overhangs的粘性末端，可直接用于与T载体连接进行TA克隆。本产品中所使用的BeyoMulti™ DNA polymerase的保真性和Taq DNA聚合酶相近，因此本产品主要推荐用于定性和半定量检测。

BeyoMulti™ DNA polymerase来源：大肠杆菌重组表达纯化获得。

BeyoMulti™ DNA polymerase纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。

失活或抑制：酚氯仿抽提可以使BeyoMulti™ DNA polymerase失活。

本产品如果用于20μl的PCR反应体系，两种包装的本产品分别足够用于100个和500个反应。

-20℃保存。

引物设计对于多重PCR的成功与否至关重要。引物的设计一方面需要满足常规的引物设计规则，避免出现非特异性扩增和无法扩增，设计好的引物对应逐一通过PCR验证，然后才能选择效果较好的引物对用于多重PCR。并且引物的设计在尽可能的情况下，如果Tm值按照Tm = 2n(A) + 2n(T) + 4n(C) + 4n(C)进行计算(例如一条引物含有3个A、7个T、4个G和6个C，那么Tm = 2X3 + 2X7 + 4X4 + 4X6 = 60)，Tm值不能低于60℃，通常按此计算Tm不低于65℃时用于多重PCR的效果会更佳。

推荐使用高质量引物(经脱盐处理、PAGE或HPLC纯化)，建议使用前预先混合所用所有引物对，调整各对引物母液浓度均达到10μM，最终使其在PCR反应体系中终浓度达0.2μM。

推荐的延伸速度为2min/kb，对于较难扩增的靶序列，可适当调整延伸时间为3-4min/kb。

如果PCR产物条带较多，建议PCR反应后电泳检测的上样量调整为约2μl，过多的上样量容易导致电泳条带不太平整。

由于多重PCR反应非常灵敏，在使用本产品时请注意避免微量待扩增DNA的污染，建议设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

需自备dNTP和Nuclease-Free Water。推荐选购碧云天生产的D7371 dNTP Mixture (2.5mM each)或D7373 dNTP Mixture (25mM each)，以及ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。

对模板GC含量过高的情况，推荐使用D7303S BeyoMulti™ PCR Enhancer (2X)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。