碧云天生产的Uracil-DNA Glycosylase (E. coli)，也称E. coli Uracil-DNA Glycosylase (UDG)或E. coli Uracil N-Glycosylase (UNG)，即大肠杆菌UDG或UNG，可催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶。Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可以水解含有dU的单链或双链DNA，但不能水解RNA或含有dU的长度不超过6个碱基DNA寡聚体。

UDG主要应用于消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题。其防止污染的原理为：在PCR反应中加入适量的dUTP，以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成含dU碱基的PCR扩增产物；后续进行PCR反应时，使用UDG酶选择性切割可能被污染而带入的之前PCR扩增产生的含有dU的单链或双链DNA，从而避免之前的PCR扩增产物可能的污染对于本次PCR扩增带来的负面影响。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that catalyzes the release of 60 pmol of uracil per minute from double-stranded, uracilcontaining DNA. Activity is measured by release of [3H]-uracil in a 50 µl reaction containing 0.2 µg DNA (10⁴–10⁵ cpm/µg) in 30 minutes at 37℃.

碧云天生产的E. coli UDG酶活性鉴定结果可参考图1。

图1.碧云天和N公司E. coli UDG酶催化水解5µl含dU碱基的PCR扩增产物效果图。使用本产品或国外N公司的E. coli UDG，在20µl体系，分别以5µl含dU碱基的1600bp大小的PCR扩增产物为底物和不同量的(0U, 0.0025U, 0.005U, 0.01U, 0.025U, 0.5U) E. coli UDG在1X E. coli UDG Buffer，37℃孵育30min，然后用1%的琼脂糖凝胶进行电泳检测。如图所示，本产品与N公司相比，具有相当的酶活。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。

来源：大肠杆菌重组、表达和纯化而获得。

纯度：不含UDG酶活力之外的内切或外切脱氧核糖核酸酶、RNase和磷酸酶活性。

用途：防止PCR产物的交叉污染；单核苷酸多态性检测(single nucleotide polymorphism detection，GMPD)；位点特异性突变；蛋白质与DNA相互作用研究；SNP基因分型；PCR产物的克隆；制备含有单链突出末端的PCR产物或cDNA。

酶储存溶液：10mM Tris-HCl (pH 7.4), 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1mg/ml BSA, 50% (v/v) glycerol。

10X E. coli UDG Buffer：200mM Tris-HCl, 10mM EDTA, 10mM DTT, pH 8.0 at 25℃。

失活或抑制：95℃加热10分钟可以使95% E. coli UDG失活。由于经95℃加热10分钟处理后，其仍保持部分活性，建议加入UDG抑制剂(如来自枯草芽孢杆菌噬菌体PBS2的Ugi蛋白或噬菌体phi29的p56蛋白)进一步抑制其酶活以免其继续降解含有dU的PCR产物。

-20℃保存，至少一年有效。

E. coli UDG酶在大多数PCR反应缓冲液体系中均有活性，但对于自行使用的PCR或RT-PCR体系，首次使用时建议先测试一下是否和所使用的体系兼容。通常取含dUTP的PCR扩增产物，参考图1加入适量UDG，观察能否有效降解含dUTP的PCR扩增产物。

dNTP/dUTP推荐选购碧云天的D7376 dNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM)。

由E. coli UDG酶消化产生的DNA链的无碱基位点可通过加热，碱处理或核酸内切核酸酶处理而除去。通常PCR反应过程中的加热步骤可以确保UDG酶消化的位点被完全剪切开。

E. coli UDG酶在比较宽泛的pH范围内具有活性，其最适pH值为8.0，E. coli UDG酶活不需要二价阳离子，并被高离子强度(> 200 mM)所抑制。

E. coli UDG酶可以在PCR反应前清除不慎污染的含dUTP的PCR产物，从而避免由于污染导致的PCR假阳性结果。

E. coli UDG在加热变性后可能由于重折叠而在较低温度下表现出残留活性。因此，建议在退火步骤中使用55℃或更高的温度进行后续PCR。

E. coli UDG可以用于DNA或cDNA的常规PCR或qPCR扩增体系，但通常不建议用于RT-PCR体系。因为在反转录条件下，通常E. coli UDG会保持活性，并可能消化新合成的cDNA。

E. coli UDG酶经95℃加热10min处理后，仍会保持少量活性，如果希望用于RT-PCR体系，需要反转录和PCR分开进行，在反转录时不使用dUTP，在反转录后加入E. coli UDG酶处理，然后进行常规的PCR或qPCR，或者建议加入UDG抑制剂(如来自枯草芽孢杆菌噬菌体PBS2的Ugi蛋白或噬菌体phi29的p56蛋白)进一步抑制E. coli UDG的酶活性。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。