碧云天提供从RNA合成到环化的一站式服务，详见：https://www.beyotime.com/support/circRNA.htm

碧云天生产的Circular RNA Synthesis Kit，即环状RNA合成试剂盒或环形RNA合成试剂盒，也称Circular RNA Preparation Kit即环状RNA制备试剂盒或环形RNA制备试剂盒，是一种非常便捷和高效的通过酶学方法将单链RNA (ssRNA)转化成环状RNA (circRNA)的试剂盒。合成的circRNA可以用于转染细胞研究circRNA的生物学功能等。近期有研究表明环状RNA也可以用作mRNA疫苗 (mRNA vaccine)，包括新冠病毒(2019-nCoV or SARS-CoV-2)等的疫苗。

环状RNA是一种通过典型的5'-3'磷酸二酯键形成的环状结构的RNA分子，这种结构特征使得其不受RNA外切酶的影响，表达更稳定，不易降解。circRNA是生物体内源存在的一种通常为单链的环状RNA，可以在内含子反向剪接(trans-splicing)等过程中产生。

环状RNA的研究可以采用质粒或病毒表达的方式，通过反向剪接等产生circRNA。但通过质粒或病毒等产生circRNA的过程中涉及反向剪接等辅助性的过程，有可能会干扰研究结果。如果能直接转染合成的circRNA，就能更直接地研究circRNA的生物学功能。

本试剂盒进行单链RNA的环化反应的原理是，通过RNA环化酶(RNA Cyclase)环化5'磷酸化3'羟基的单链RNA。

本试剂盒环化效率高，操作便捷。环化效率通常可以达到95%以上，且操作仅需一步孵育即可完成。通常本试剂盒能将95%以上的5'磷酸化3'羟基的单链RNA (ssRNA)转化成环状RNA (circRNA)，因此环化产物可以不需要切胶纯化，仅需热失活环化酶后通过乙醇沉淀即可用于后续实验。

本试剂盒催化5'磷酸化3'羟基的单链RNA分子环化连接生成环状RNA的效果参见图1。

图1. 使用碧云天生产的Circular RNA Synthesis Kit制备环状RNA (circular RNA, circRNA)的效果图。反应体系为20μl，单链RNA的终浓度为0.5μM，反应条件为37℃孵育30min，反应完毕后在65℃孵育15min终止反应，随后取样用15%尿素(7M)变性聚丙烯酰胺凝胶在冰水浴中进行电泳，最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本试剂盒在30min内就可以将95%以上的5'磷酸化3'羟基的单链RNA转化为环状RNA。

本试剂盒如果用于20μl的反应体系，分别可以用于20次和100次的circRNA合成反应。

-20℃保存，至少一年有效。

底物单链RNA的3'端必须是羟基，5'端可以是磷酸化，也可以是腺苷酰化。

本试剂盒提供的环化反应体系可以按照比例放大反应体系，对环状RNA产物的得率无显著影响。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。