碧云天生产的重组SENP2蛋白酶(His-tag)，即Recombinant SENP2 (His-tag)或rSENP2 (His-tag)，是一种通过 E.coli重组表达的包含人源SENP2的酶活结构域(Asp364-Leu589)和His标签的蛋白酶，理论分子量为26.8kDa，常用于体外去SUMO化修饰(DeSUMOylation)反应，或切除融合表达的重组蛋白的SUMO1、SUMO2或SUMO3标签。

rSENP2不识别特定的氨基酸序列，而是高度特异性地识别人源SUMO1/2/3三维结构特征，并在其尾部QTGG/X氨基酸残基之间进行高效酶切，释放成熟形式的SUMO1/2/3，可用于体外去SUMO化修饰反应或移除融合表达的重组蛋白的SUMO标签。

本产品N端带有His-tag，可以通过相应的抗体检测或通过镍柱吸附去除。

类泛素蛋白修饰分子(Small ubiquitin-like modifier, SUMO)，也被称为泛素样修饰因子小蛋白、泛素样小分子修饰因子或小泛素相关修饰物，是一个广泛存在于真核生物的蛋白家族。在人体中共有4种SUMO：SUMO1、SUMO2、SUMO3和SUMO4，长度约100aa，理论分子量约12kDa，在氨基酸水平SUMO1与SUMO2的相似度为43%，SUMO2与SUMO3的相似度为96%，SUMO2与SUMO4的相似度为87% [1]。与泛素化(Ubiquitination)类似，SUMO通过类泛素蛋白(Ubiquitin-like proteins, Ubls)活化酶(Ubl activating enzyme, E1)、结合酶(Ubl conjugating enzyme, E2)和连接酶(Ubl protein ligase, E3)共价连接到特定蛋白的赖氨酸上，这一过程被称为SUMO化修饰(SUMOylation)。SUMO化修饰是一种翻译后修饰，参与细胞的调控，如细胞内转运、转录调控、细胞凋亡、蛋白质稳定性、压力应激和细胞周期等的调控等[2]。

人体中共有7种SENPs (Sentrin-specific proteases)：SENP1、SENP2、SENP3、SENP5、SENP6、SENP7和SENP8，其中SENP8作用于泛素家族成员NEDD8，其余6种SENPs可以识别、切割并释放成熟形式的SUMO1/2/3用于SUMO化修饰，也可以去SUMO化修饰，即将连接到特定蛋白赖氨酸上的SUMO1/2/3切除(图1) [3]。碧云天的SUMO Protease (P2312) 是一种来自 Saccharomyces cerevisiae的高活性的半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl protease) Ulp1 (Ubiquitin-like protein-specific protease 1)基因片段的重组表达蛋白，可以水解SUMO羧基端(C端) x-Gly-Gly-x肽段中Gly-Gly后的肽键，和本产品识别的SUMO标签有所不同，不能相互替换。同时本产品和SUMO Protease (P2312) 也都不能切割SUMO^EU1标签。

图1. 人源SENPs加工处理SUMO1/2/3和去SUMO化修饰示意图。

SUMO3标签(SUMO3-tag)融合于目的蛋白N端已广泛应用于大肠杆菌体系的重组蛋白表达纯化，SUMO3标签作为分子伴侣辅助融合目的蛋白的折叠，增加重组蛋白的表达量，改善溶解性，保护目的蛋白不被降解。SUMO3标签与GST (Glutathione S-transferase)、MBP (Maltose binding protein)、Trx (Thioredoxin)、NusA (Transcription termination anti-termination factor)和DsbA (Protein disulfide isomerase I)等常用融合标签相比体积更小，而且不需要在融合标签和目的蛋白之间添加TEV (Tobacco etch virus)、EK (Enterokinase)或IIa (Thrombin)等蛋白酶酶切位点。SUMO3标签三维结构可以被rSENP2高特异性地识别，并在其尾部2个连续的Gly氨基酸残基处高效酶切，从而释放融合表达的目的蛋白，便于SUMO3标签的移除[4,5]。碧云天生产的重组SENP2蛋白酶(His-tag)酶切SUMO3标签融合蛋白的效果参考图2。

重组SENP2蛋白酶(His-tag) (P2313)酶切SUMO3标签融合蛋白的效果图。在20μl反应体系中，加入10µg SUMO3标签融合蛋白及1μl经100倍稀释的重组SENP2蛋白酶(His-tag)，37℃孵育1小时后，加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289)，混匀后95℃加热5分钟，使用BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(P0520)进行电泳检测并使用BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液(P0017F)染色。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

本产品的基本信息如下表：

rSENP2最佳酶切温度为37℃，在较宽的pH范围(6.0-10.0)，较宽的温度范围(2-37℃)，较宽的离子强度范围(0-1M NaCl，0-500mM Imidazole)内均具有较高的酶活性。在实际操作过程中，建议4℃酶切过夜以尽可能保持重组蛋白的活性。rSENP2在0.5-2mM DTT存在的情况下酶活性更高，建议酶切体系中加入适当浓度的DTT以提高酶切效率。

rSENP2的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor)如PMSF、AEBSF、Bestatin、Pepstatin、E-4、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸(Cysteine)残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制rSENP2的酶活力。

本产品用于移除重组蛋白SUMO3标签酶切反应时，如果按照1mg SUMO3标签融合的重组蛋白使用1μl rSENP2 (100U/μl)在4℃酶切过夜，本产品的500U、2KU、10KU和50KU包装，分别可用于约5mg、20mg、100mg和500mg带有SUMO3标签融合重组蛋白的酶切。

-20℃保存，两年有效。

本产品含50%甘油，-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存，冻融可能会降低本产品的酶活性。

本产品较为粘稠，吸取时需注意取样量准确，加样后请注意充分吹打混匀，避免产生气泡。

请仔细核对所使用的SUMO标签是否适合本产品。不同的SUMO标签可能需要使用不同的相应蛋白酶的。

本产品的酶活性与SUMO3标签和目的蛋白形成的融合蛋白的空间结构有较大的相关性，实测对于一些SUMO3标签融合蛋白的活性可以达到说明书标注的活性，但对于某些UMO3标签融合蛋白的酶切活性会差别比较大。对于遇到本产品酶活性相对较低的情况，需要大幅度加大酶的用量。如果希望获得更高的酶切活性，此时建议在许可的范围内适当增减目的蛋白与SUMO3标签连接处的氨基酸序列，以获得更好的酶切效果。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。