谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(DTNB法) (Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with DTNB)是碧云天自行研制的一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。碧云天研发的DTNB法和传统的NAPDH法(S0056)相比，吸光度变化范围更大，有效改善了检测灵敏度和线性范围，能更有效地对Gpx进行酶活性定量分析。

绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0059S)配合使用，可定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。

谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。本试剂盒利用了一种间接测定的方法。参考下图，在GSH相对比较充足并有足量有机过氧化物存在的情况下，谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)可以催化GSH生成GSSG。如果谷胱甘肽过氧化物酶的用量在适当的范围内并成为反应的限速因素，就会有适量的GSH剩余，剩余的GSH可以和生色底物DTNB反应产生GSSG和黄色的TNB。此时，谷胱甘肽过氧化物酶活性的高低就决定了剩余的GSH的量，从而决定了黄色TNB形成的量，因此TNB的形成量和谷胱甘肽过氧化物酶的活力负相关。从而通过测定黄色TNB的吸光度就可以计算出谷胱甘肽过氧化物酶的活性。本试剂盒具体反应原理见下图，GPx为谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase)，R-OOH为过氧化物，TNB为黄色产物。

图1.碧云天研制的谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(DTNB法)的检测原理图。

本试剂盒提供的有机过氧化物试剂(t-Bu-OOH)在没有谷胱甘肽过氧化物酶存在的情况下不会和GSH产生反应，也不会被细胞内的过氧化氢酶催化而分解。因而可以较为特异地检测出谷胱甘肽过氧化物酶的活力。

由于t-Bu-OOH不能被不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶所催化，所以本试剂盒可以比较特异地定量检测最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

本试剂盒可检测组织匀浆产物、细胞裂解产物等样品中谷胱甘肽过氧化物酶的活性。一个试剂盒可进行100次检测。

-20℃保存，一年有效。GSH和DTNB在配制成溶液后，需适当分装，-20℃保存至少3个月有效。

本试剂盒检测时涉及氧化还原反应，因此所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。如果在样品中的还原剂无法避免，例如DTT、巯基乙醇等，则这些还原剂的总浓度至少低于0.1mM。0.15mM的DTT可以抑制40%的酶活力。

常用的Triton X-100、Tween-20等去垢剂都含有较高水平的过氧化物，会影响本试剂盒的测定。如果必须使用这些去垢剂，最好使用纯度较高并注明含较低过氧化物的去垢剂。

反应体系中加入DTNB溶液后，可以在极短的时间内消耗掉剩余的GSH，使GPx催化的反应终止。因此计算酶活力时，仅使用DTNB加入之前的反应时间来进行计算即可。

样品可以立即测定，也可以-80℃冻存待以后测定。

一定要严格控制反应时的温度为25℃，否则会引起较多误差。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。