碧云天研发生产的 Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA (FISH Kit for RNA)，即荧光原位杂交RNA检测试剂盒，是一种通过将荧光标记的寡核酸探针(DNA或RNA)与细胞或组织中的目标RNA按碱基互补配对原理进行杂交，形成荧光标记核酸探针与目标RNA的杂交复合物，随后就可以在荧光显微镜下观察并确定目标RNA细胞内定位的高灵敏度检测试剂盒。

本试剂盒操作简单便捷。通常一天内即可完成检测。本试剂盒所使用的荧光标记核酸探针与靶RNA形成杂交复合物后，就可以直接进行荧光观察。

本试剂盒背景低、灵敏度高。本试剂盒提供了专门的乙酰化试剂，并且提供了额外的封闭试剂Yeast RNA (100X)，能有效降低背景，提高检测灵敏度。

本试剂盒样品适用范围广。本试剂盒可用于多聚甲醛或福尔马林固定的组织、石蜡或冰冻切片以及细胞等样本的靶RNA的定位分析。本试剂盒适用于样品的异质性(sample heterogeneity)检测，非编码RNA (包括miRNA和lncRNA等)的单细胞水平的高灵敏度检测，基因组来源RNA的追踪检测以及目标RNA的高通量单细胞定量检测(high-through single-cell quantitation)。

本试剂盒可以提供目标RNA的单细胞空间分布信息。基因的表达分析通常采用转录组测序、qPCR、Northern、基因微阵列芯片等技术[1]，尽管这些技术提供了大量信息，但这些检测方法很容易掩盖单细胞基因表达的差异性，特别是RNA在细胞内的空间分布特性，采用本试剂盒可以特异且高 灵敏地揭示单细胞水平基因表达的空间分布情况。

本试剂盒兼容后续荧光染色。本试剂盒具有较好的荧光兼容性，除特异杂交的荧光探针信号外，还可以配合DAPI (C1002/C1005/C1006), Hoechst 33342染色液(C1025/C1026), Hoechst 33258染色液(C1017/C1018), Propidium Iodide (ST511/ST512)等荧光染料。

碧云天Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA使用Cy3标记的红色荧光探针检测Hela细胞18S rRNA的原位杂交效果请参考图1。

图1. 碧云天研发生产的Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA (R0306)用于Hela 细胞18S rRNA的荧光原位杂交(FISH)检测效果图。图A为使用阴性对照探针0.5µg/ml Cy3-18S rRNA sense probe的FISH检测效果图，图B为DAPI染色效果图，图C为图A和图B的叠加图效果；图D为使用阳性红色荧光探针0.5µg/ml 18S rRNA Cy3 FISH Probe (R0312)即Cy3-18S rRNA antisense probe的FISH检测效果图，图E为DAPI染色效果图，图F为图D和图E的叠加效果图。Scale Bar均为100µm。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

-20℃保存，一年有效。Proteinase K (20mg/ml)和Yeast RNA (100X)须-20℃保存；Hybridization Solution和DAPI须-20℃避光保存；Acetylation Solution A, Acetylation Solution B和Wash Buffer (20X)可4℃或室温保存。

建议尽量使用新鲜样品进行FISH检测，固定后保存的样品，RNA通常会随着时间的延长而逐步发生降解，影响FISH的检测效果。

需要自备的试剂：BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)或DEPC水(R0021/R0022)、4%多聚甲醛固定液(P0099)、PBS, pH7.3 (DNase, RNase & Protease free, Sterile) (ST477)、盐酸、Formamide deionized、抗荧光淬灭封片液(P0126)、多聚赖氨酸(C3012/C0313/ST508/ST509) (酌情自备)、盖玻片(FCGF24/FCGF22) (酌情自备)、冰冻或石蜡切片相关试剂(酌情自备)、目标RNA荧光探针(须自行购买或合成)。

对于常规的哺乳动物细胞或组织样品的检测，Hybridization Solution使用前通常可以添加Yeast RNA后使用，可以有效降低背景。对于Yeast RNA可能产生干扰的情况，可以不添加Yeast RNA。

建议Hybridization Solution适当分装后避光保存。

预杂交温度确定后，通常后续的探针变性、杂交、洗涤的温度宜保持一致。

任何一种试剂都必须全部解冻并混匀后使用。

由于涉及 RNA 操作，需要严格按照 RNA 操作的规范进行，避免 RNase 污染。实验中用到的吸头、离心管和检测涉及的器具和相关溶液都必须是无RNA酶污染的(RNase free)。推荐使用碧云天生产的BeyoGold™系列中明确标注RNase free的耗材产品。实验中用到的玻璃或塑料器具、仪器设备、桌面等表面也尽量进行RNase free处理。推荐清洗或擦拭后使用碧云天生产的R0127 RNase, DNase, DNA and RNA Away参考产品说明书通过喷雾处理快速、便捷、高效地清除实验仪器、设备、器具表面的RNase污染。RNase, DNase, DNA and RNA Away处理后，仪器设备等表面可以使用洁净纸巾擦拭干净，和样品直接接触的器具表面可以使用不含RNase的超纯水适当冲洗数次。不含RNase的超纯水推荐使用碧云天的ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)或R0021/R0022 DEPC水(DNase、RNase free)。

推荐使用R0312 18S rRNA Cy3 FISH Probe或R0323 U6 snRNA Cy3 FISH Probe作为阳性对照，分别可以对细胞浆中的18S rRNA或细胞核中的U6 snRNA进行荧光染色。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。