碧云天的线粒体膜电位检测试剂盒(Rhodamine 123) (Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with Rhodamine 123)是一种以Rhodamine 123为荧光探针对线粒体进行染色并进行膜电位检测的试剂盒。本试剂盒可用于活细胞线粒体膜电位的检测，也用于细胞凋亡的检测。本试剂盒可使用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等荧光检测设备进行检测。

Rhodamine 123也称2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-yl)benzoic acid methyl ester，中文名为罗丹明123，分子式为C₂₁H₁₇ClN₂O₃，分子量为380.82，CAS号为62669-70-9。Rhodamine 123是一种通透细胞膜的黄绿色阳离子荧光探针，最大激发光波长为507nm，最大发射光波长为529nm。Rhodamine 123的化学结构式和激发、发射光谱图参考图1。

图1. Rhodamine 123的化学结构式和激发、发射光谱图。

本试剂盒检测线粒体膜电位的原理如下。在正常细胞中，Rhodamine 123能够依赖线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potential, ΔΨm)选择性进入线粒体基质，可发出明亮的黄绿色荧光；当细胞发生凋亡或坏死时，线粒体膜电位丢失，线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore, MPTP)持续开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm)的崩溃，Rhodamine 123从线粒体中释放出来，从而导致线粒体内黄绿色荧光强度的明显降低。此外有报道，在个别特定情况下，Rhodamine 123探针在线粒体内过度聚集后可能会出现自发淬灭(self-quenching)现象，线粒体内黄绿色荧光强度降低，而在凋亡发生时，线粒体中黄绿色荧光增强。使用本产品，按照说明中推荐的实验条件，对于实际测试过的细胞仅观察到了凋亡或坏死时Rhodamine 123的荧光染色减弱或消失的现象。本产品染色后，可用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等仪器检测细胞，通过荧光信号的强弱来确定线粒体膜电位的变化和凋亡或坏死的发生。

Rhodamine 123可以快速通过细胞膜，仅需几分钟就可以被具有活性的线粒体所捕获(sequestered by active mitochondria)，并且对细胞没有明显毒性。

本试剂盒可以应用于大多数的哺乳动物细胞及酵母。由于Rhodamine 123在线粒体内的积累依赖于线粒体膜电位，因此本试剂盒仅限用于存活的细胞或组织的检测，不可用于固定或冻存的细胞或组织的检测。

本试剂盒提供的Rhodamine 123为1000X溶液，该溶液经过优化，对大多数细胞都适用。但为了得到满意的结果，对于不同类型的细胞请自行进行一定摸索。Rhodamine 123的终浓度一般为0.1X-5X，最优先的推荐终浓度为1X，染色时间通常为20~60分钟。试剂盒提供的CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照，终浓度一般为1-20μM，最优先的推荐终浓度为10μM。同时，本试剂盒提供了检测缓冲液，该缓冲液可在一段时间内维持细胞的正常状态，并给细胞提供一定的营养，效果比PBS或HBSS更好。使用本试剂盒检测NRK-52E细胞线粒体膜电位变化的效果参考图2。

图2. 使用线粒体膜电位检测试剂盒(Rhodamine 123)的检测效果图。正常的NRK-52E中，Rhodamine 123在线粒体内聚集发出明亮的黄绿色荧光；使用CCCP诱导使线粒体膜电位下降后，线粒体内黄绿色荧光强度明显下降，几乎完全消失。

碧云天各种线粒体膜电位检测试剂盒的比较和选择，请参考:

https://www.beyotime.com/support/MitochondrialMembrane.htm。

本试剂盒小包装C2008S，如果用于流式细胞仪，每个样品的检测体系体积为0.5ml时，可以进行200次检测；6孔板每孔检测体系的体积为1ml时可以检测100次，96孔板每孔检测体系的体积为100μl时可以检测1000次。

-20℃保存，一年有效。其中Rhodamine 123 (1000X)需要-20℃避光保存。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

本试剂盒仅限于用于存活的细胞或组织的检测，不可用于固定或冻存的细胞或组织样品的检测。

检测缓冲液经过过滤除菌处理，在使用时须注意避免微生物污染，否则很可能严重影响染色效果。如果检测缓冲液发生浑浊等明显的微生物污染，就不能继续使用。

CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板，建议使用96孔黑板(碧云天的FCP966 BeyoGold™全黑96孔细胞培养板)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。