碧云天生产的细胞自噬与细胞毒性染色检测试剂盒(MDC/PI法)，即Autophagy Staining Assay Kit with MDC and PI，是一种使用丹酰尸胺，也称单丹磺酰尸胺、丹酰尸胺或丹酰戊二胺(monodansylcadaverine, MDC)和碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)作为荧光探针快速便捷地检测细胞自噬和细胞毒性的试剂盒。

自噬(autophagy)是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关，在饥饿等环境条件下，细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料，促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个研究热点。

MDC是细胞自噬检测最常用的荧光探针之一。MDC可以通过离子捕获(ion trapping)和与膜脂的特异性结合，从而特异性标记自噬体(autophagosome)，也称autophagic vacuole，因而常用于细胞自噬的检测。MDC是一种嗜酸性荧光探针，很多酸性膜性结构也会被MDC染色，因此MDC染色时正常的细胞也会有一定的染色背景。

本产品的染色原理决定了本产品只能用于培养的细胞或者组织的细胞自噬荧光染色检测，不能用于冻存的或固定的细胞、组织或者组织切片的染色检测。

本试剂盒还提供了碘化丙啶染色液，可以同时进行细胞毒性的检测。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。坏死细胞，自噬染色可能呈现阳性，也可能呈现阴性，都是合理的情况。

使用本产品染色后可以通过荧光显微镜拍照观察，也可以通过荧光酶标仪或流式细胞仪进行荧光检测。荧光显微镜观察时MDC染色可以使用紫外区激发光激发，发出绿色荧光；荧光酶标仪或流式细胞仪推荐的激发波长为335nm (330-360nm均可)，发射波长为512nm (510-540nm均可)。PI和DNA形成复合物后，最大激发光波长为535nm，最大发射光波长为617nm，呈现荧光。

本产品用于细胞自噬和细胞毒性染色的效果参考图1。

图1.细胞自噬与细胞毒性染色检测试剂盒(MDC/PI法)的染色效果图。NRK-52E细胞用碧云天生产的C0213 Earle's Balanced Salt Solution (EBSS)处理2h后，使用本试剂盒进行荧光染色，并在荧光显微镜下观察染色效果。图中EBSS处理后出现的绿色荧光亮点即为自噬的特征性变化。由于图中未出现细胞坏死，因此图中细胞的PI染色均呈现阴性。本图仅供参考，实际检测效果可能会因为实验条件的不同而有所差异。

本产品如果用于6孔板或96孔板的检测，小包装分别可以检测50或500个孔，中包装分别可以检测200或2000个孔。

-20℃保存，一年有效。其中MDC (1000X)和PI (1000X)需要避光保存。Assay Buffer (10X)可以4℃保存，至少6个月有效。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。MDC对光照特别敏感，操作过程中请尽量注意避光。

MDC (1000X)对人体有害，请注意适当防护。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。