细胞膜绿色荧光染色试剂盒(DiO)，Cell Plasma Membrane Staining Kit with DiO (Green Fluorescence)是一种以DiO为荧光探针，并提供了染色增强剂、能快速灵敏地对细胞膜进行绿色荧光染色标记的试剂盒。

DiO即DiOC₁₈(3)，全称为3,3'-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate，分子式为C₅₃H₈₅ClN₂O₆，分子量为881.72，CAS号为34215-57-1，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现绿色荧光。DiO是一种亲脂性羰花青(carbocyanine)染料，具有很长的亲脂性烃链，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色，染色后非常稳定。

DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiO被激发后可以发出绿色的荧光，DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考图1。其中，最大激发波长为484nm，最大发射波长为501nm。

图1. DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱。

DiO被广泛用于正向或逆向的、活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。DiO毒性很低，通常不会影响细胞的生存力(viability)。DiO对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI，有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。

本试剂盒提供了染色增强剂，使细胞膜染色更加快速，荧光染色更加明亮，染色背景更低。

本试剂盒除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

本试剂盒可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。本试剂盒对HeLa细胞的染色效果参考图2。

图2. 细胞膜绿色荧光染色试剂盒(DiO)对HeLa细胞的染色效果。DiO的染色时间为10分钟。

DiO染色后可以兼容免疫荧光实验。建议使用碧云天的免疫染色通透液(Saponin) (P0095)或使用洋地黄皂苷(ST1272)配制的不会溶解细胞膜的通透液进行通透，其它去垢剂配制的通透液可能会溶解细胞膜上的脂类物质，造成DiO失去结合位置，最终导致DiO的染色失效。但通透也可能会影响DiO在细胞膜上的定位并会增加细胞内的染色，具体实验中需根据实验的需求选择合适的细胞通透液。

本试剂盒小包装C1993S，如果用于流式细胞仪，每个样品的检测体系体积为0.5ml时，可以进行200次检测；96孔板每孔检测体系的体积为100μl时可以进行1000次检测。

-20℃避光保存，一年有效。染色增强剂(400X)和染色缓冲液也可保存在4℃。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

染色缓冲液经过过滤除菌处理，在使用时须注意避免微生物污染，否则很可能严重影响染色效果。如果染色缓冲液发生浑浊等明显的微生物污染，就不能继续使用。

如果染色时间过长或染色后细胞继续培养，探针也可能进入细胞内而染色其它细胞器的膜。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。