碧云天生产的植物原生质体分离试剂盒(Plant Protoplasts Isolation Kit)，是一种能够简单、快捷地通过酶学方法消化植物尤其是拟南芥(Arabidopsis thaliana)细胞壁中的纤维素并释放出大量且具有生物活性的原生质体的试剂盒。使用本试剂盒分离出的原生质体可用于质粒DNA转染以及原生质体融合等实验研究。

植物原生质体是指去除掉细胞壁后由细胞膜包被的具有生命活力的植物细胞体。植物细胞壁的主要成分为纤维素(cellulose)，半纤维素(hemicellulose)和果胶(pectin)等。植物细胞壁组分被适当的酶消化降解后，就能释放出无细胞壁包被的植物原生质体。原生质体是开展一系列植物细胞研究的重要材料，可以用于短时间基因表达(transient gene expression)、病毒感染(viral transfection)、体细胞杂交(somatic hybridization)、电生理研究(electrophysiological study)和形态学研究(morphological study)等，从而在植物亚细胞定位(subcellular localization)、蛋白活性分析以及蛋白与蛋白相互作用(protein-protein interaction)等研究方面发挥重要作用。

使用本试剂盒处理拟南芥叶片所获得的原生质体效果图(图1)：

图1. 碧云天生产的植物原生质体分离试剂盒(Plant Protoplasts Isolation Kit)分离制备的拟南芥原生质体效果图。酶解体系配制(5ml)：称取0.095g Enzyme Mix，加入2.5ml 2X Digest Buffer，55℃水浴10min使酶充分溶解，冷却至室温后，分别加入100μl Digest Solution I，10μl Digest Solution II和50μl Digest Solution III，加无菌水定容至5ml，轻轻混匀并溶解后，用0.45μm针头滤器(FF365)过滤。生长状态良好的拟南芥叶片20片，去除叶片的尖端与基部，用刀片(FS205)切成0.5-1mm小条，浸入细胞壁消化液中，真空干燥器抽真空30min，避光条件下消化3h后，轻轻摇动并吸取少量消化液在光学显微镜下观察游离的原生质体(图A)。消化比较充分后，将所得原生质体溶液用1X Dilution Buffer进行等体积稀释，再用70μm孔径的细胞过滤器(FSTR070)过滤所获得的原生质体溶液，以去除未消化完全的叶片，室温下100g离心1min，去除上清，将其重悬于500μl Resuspension Buffer中，吸取100μl重悬的原生质体，光学显微镜下观察原生质体的数量与形态(图B)。实际的检测效果会因检测条件的不同而存在差异，本图仅供参考。

按照每次使用5ml细胞壁酶消化体系计算，本试剂盒可用于20次细胞壁酶消化反应。本试剂盒每个5ml反应体系可处理0.1g左右的拟南芥叶片(约10~15叶片)，操作较好的情况下每5ml体系可获得约50-70万个原生质体(不同植物不同操作会有一定的差异)，可满足约25-100个样品的原生质体质粒转染操作(按照每样1-2万个细胞计算)。

-20℃保存，至少一年有效。C0362S-2 Enzyme Mix可长期4℃保存，其余组分4℃存放数天不会影响使用效果。数天内连续使用的情况，可以全部保存在4℃。

细胞壁消化液必须现配现用，不能配制后冻存用于后续用途。

请按照试剂盒要求的保存条件存放相关试剂，使用时请将各溶液充分融解并混匀，尽量避免过多的反复冻融。

2X Digest Buffer (C0362S-1)以及Resuspension Buffer (C0362S-7)容易被微生物污染，使用时须严格按照无菌操作规范进行或者适当分装后使用。

所制备的原生质体如果后续需要用于转染、培养等相对较长时间的用途，所有操作都必须按照无菌操作规范进行。

需使用者自备的实验仪器与耗材：水浴锅(E0530)，0.45μm针头滤器(FF365)，手术刀片(FS205)，平头镊子(FS035)，70μm细胞过滤器(FSTR070)以及离心管等其它耗材。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。