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碧云天 Lenti-EF1α-Luc-T2A-Puro (10^8TU/ml, 萤光素酶示踪用)(C4001-100μl)

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    C4001-100μl
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  • 商品名称:碧云天 Lenti-EF1α-Luc-T2A-Puro (10^8TU/ml, 萤光素酶示踪用)(C4001-100μl)
  • 商品编号:C4001-100μl
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2022-10-14
  • 商品毛重:100.100千克
  • 库存: 11231
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C4001-100μl Lenti-EF1α-Luc-T2A-Puro (10^8TU/ml, 萤光素酶示踪用) 100μl 621.00元
C4001-1ml Lenti-EF1α-Luc-T2A-Puro (10^8TU/ml, 萤光素酶示踪用) 1ml 4142.00元

Lenti-EF1α-Luc-T2A-Puro,即Lentivirus expressing firefly luciferase and puromycin,是碧云天自行研发的重组慢病毒,可以在大多数哺乳动物细胞(包括原代细胞和干细胞)中通过EF1α启动子适度表达组成型萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)和嘌呤霉素(puromycin)抗性基因,感染细胞后可以使用嘌呤霉素筛选稳定株。本产品可作阳性对照或者海肾萤光素酶(renilla luciferase)报告基因的内参,也常被用于萤火虫萤光素酶基因标记的肿瘤细胞系的构建及后续用于活体生物发光成像(活体成像) 以便于进行肿瘤细胞的活体示踪。

EF1α (EF1a)启动子是一种来源于延伸因子1α (elongation factor 1 alpha, EF1A)基因的强哺乳动物表达启动子,可在多种细胞中稳定驱动其下游基因的组成型表达,也可以用于干细胞、原代细胞、造血细胞等。

T2A是来源于明脉扁刺蛾病毒(Thosea asigna virus, TaV),是2A肽的一种,编码产生一种具有自我加工能力的短肽,能够在翻译后进行自我剪切,可以实现利用一个转录本翻译出多个蛋白质的功能。T2A目前被认为具有最高的“剪切”效率,很多情况下接近100%,所以通常T2A上下游蛋白的表达水平相当,但上游蛋白的C端会添加一些额外的T2A肽段的残基,而下游蛋白的N端将会有额外的脯氨酸。本产品表达的萤火虫萤光素酶和嘌呤霉素抗性基因的正常功能均不受额外的氨基酸影响。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出波长为560nm左右的生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。本病毒中的萤火虫萤光素酶编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达。

慢病毒感染细胞后会将目的基因随机整合到基因组DNA上,因而可以长期稳定地表达目的蛋白,并且几乎可以感染所有哺乳动物细胞,在很多不分裂的细胞中也可以长期稳定表达,广泛应用于细胞和动物实验。

碧云天的Lenti-EF1α-Luc-T2A-Puro是复制缺陷型慢病毒。其3' LTR的增强子功能发生缺失,形成了自失活(self-inactivating) 3' LTR,并且5' LRT中的U3区域替换成EF1α启动子,在感染普通的细胞后不能进行复制和扩增,从而有效降低了本产品在活体生物中的风险。

碧云天推荐的慢病毒感染不同种类体外培养细胞的MOI值参见下表。

Cell line Tissue Cancer/cell type Species MOI
A431 Epithelial Carcinoma Human 5
A549 Lung Carcinoma Human 5
Astrocytes Nervous system Primary Human 1
B16-F10 Epithelial Melanoma, metastatic Mouse 5
BMM Bone Marrow Primary Human 8
BxPC-3 Pancreas, epithelial Adenocarcinoma Human 10
H3255 Lung Carcinoma, NSCLC Human 10
HCT116 Colon Carcinoma Human 5
HeLa Cervix Carcinoma, epithelioid Human 3
HEK293T Kidney Tumor Human 5
Hepa1-6 Liver Carcinoma Mouse 3
HMVEC Endothelial Endothelial, microvascular Human 100
HT-29 Colon Adenocarcinoma Human 3
HUVEC Umbilicus Endothelial cells Human 100
Jurkat Blood Leukemia, Acute T cell Human 10
LLC-1 Lung Carcinoma Mouse 6
LNCaP Prostate Carcinoma Human 5
MM200 Skin Melanoma Human 5
MCF-7 Breast Adenocarcinoma Human 2
MDA-MB-231 Breast Adenocarcinoma Human 1
MM-AN Skin Melanoma, metastatic Human 16
MMC Breast Carcinoma Mouse 4
MRC-5 Lung, embryonic Fibroblasts Human 1
NB4 Blood Leukemia, acute promyelocytic Human 10
PC12 Adrenal gland Pheochromocytoma Rat 20
SKOV-3 Ovary Adenocarcinoma Human 15
U-2 OS Bone Osteosarcoma Human 5

实验室常用的逆转录病毒(Retrovirus)、慢病毒(Lentivirus)、腺相关病毒(AAV)和腺病毒(Adenovirus)的主要特征之间的比较和差别参见下表。具体的特定病毒的一些特征和下表相比可能会有一定差异。

Retrovirus Lentivirus AAV Adenovirus
Genome ssRNA(+) ssRNA(+) ssDNA dsDNA
Coat Enveloped Enveloped Naked Naked
Particle size 90-100nm 90-100nm 20-30nm 60-90nm
Genome size 7-10kb 9kb 5kb 38-39kb
Genome integration Yes Yes No No
Packaging capacity 2.5-5kb 2.5-6kb 2.5-4.5kb 3-8kb
Infection tropism Dividing cells Dividing and non-dividing cells Dividing and non-dividing cells Dividing and non-dividing cells
Relative Transduction Efficiency ND 70% 70% 100%
Expression started 48-72h 48-72h 72-96h 24-48h
Expression duration > 2 months > 2 months > 6 months 3-4 weeks
Expression level Medium Medium Medium High
Immune response Low Low Very low High
In vivo safety Medium Medium High Low
Titer before concentration (IFU/ml) 106 107 1011 107
Titer after concentration (IFU/ml) ND 108 0.5-1×1013 1010
Able to obtain high MOI No (≤ 10 copies integrated) No (≤ 10 copies integrated) Yes Yes
Biosafety level BSL-2 BSL-2 BSL-1 BSL-2

本产品的滴度不低于10^8TU/ml,适合细胞实验或活体动物实验。TU, transduction unit,即转导单位。TU通过本产品感染HEK293T细胞72小时后,抽提细胞基因组DNA进行qPCR测定。MOI (Multiplicity of Infection)是病毒感染细胞时,病毒数量与细胞数量的比值。使用10^8TU/ml的本产品,如果按照5 MOI感染6孔板的细胞,每孔50万细胞计算,1ml共可以感染40个孔;如果按照5 MOI感染24孔板的细胞,每孔10万细胞计算,1ml共可以感染200个孔。如果MOI值提高,那么相应可以感染的孔数会减少;如果MOI值下调,那么相应可以感染的孔数会增加。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C4001-100μl Lenti-EF1α-Luc-T2A-Puro (10^8TU/ml) 100μl
C4001-1ml Lenti-EF1α-Luc-T2A-Puro (10^8TU/ml) 1ml
说明书 1份
保存条件:

-80℃保存,一年有效。-20℃保存,1-2个月内有效。4℃保存,一周内有效。

注意事项:

反复冻融会降低病毒滴度,如有必要请在收到本产品后分装保存。分装时必须在冰浴上进行。病毒融解后,如果在一周内使用,可以放置于4℃,但须注意4℃存放时间越长,滴度下降越明显。如果-80℃保存时间超过一年,可能会导致滴度下降,此时建议重新测定病毒滴度。

本产品使用前请仔细阅读附录1《慢病毒使用安全规范》。本产品生物安全等级为Biosafety Level 2 (BSL-2),在按照常规的微生物实验操作要求进行操作(Standard microbiological practices)的基础上,还需要注意限制接触、生物危害提示、显著的警示标识、并制定相应的安全规范。

病毒操作中应注意有效防护,绝对禁止在生物安全柜内有任何皮肤直接暴露的情况。实验完成后,请及时清洗双手。严禁直接接触病毒,如意外接触,请及时用清水冲洗,并适当用70%乙醇对皮肤进行消毒。

任何接触过病毒的材料、试剂、样品,应经消毒处理,可以采用1%的SDS溶液、或84消毒液(1:20)浸泡30分钟以上,或121℃高压灭菌30分钟。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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