碧云天生产的BeyoAOF™无血清细胞冻存液(BeyoAOF™ Serum-free Cell Freezing Medium)，也称BeyoAOF™无血清细胞冷冻存液(BeyoAOF™ Serum-free Cell Cryopreservation Medium)，是一种不含血清、无蛋白、无须程序降温并能长期-80℃保存细胞的即用型细胞冻存液，适用于绝大部分的哺乳动物细胞冻存。本无血清细胞冻存液不含常用的胎牛血清(FBS)、不含任何动物来源(animal origin-free, AOF)的蛋白质，能减少细胞污染风险，确保细胞安全；而且使用本无血清细胞冻存液，可直接置于-80℃长期保存，无须程序性降温，使用非常便捷。

细胞冻存液，也称细胞培养冻存培养基或细胞冻存培养液等，英文名为Cell Culture Freezing Medium、Cell Freezing Solution或Cell Cryopreservation Medium等。

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃的液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性长期保存起来，在需要的时候再复苏细胞用于实验。同时适度地冻存一定量的细胞，可以防止因细胞被污染或其它意外事件而使细胞无法继续培养，可以起到细胞保种的作用。

本产品为即用型溶液，使用方便。本产品是即用型的无菌溶液，待冻存的细胞收集细胞沉淀后，加入适量冻存液混匀即可，无需自行配制任何溶液，使用方便。

本产品无须程序降温，可直接-80℃冷冻。细胞冻存和复苏一般采用“慢冻快融”的方法，在细胞冷冻过程中通常需要使用BeyoCool™细胞冻存盒(FCFC012)等程序性降温盒或采取程序性降温步骤。而使用本无血清细胞冻存液，无须程序性降温，可直接置于-80℃冷冻。

本产品能长期-80℃保存细胞，无须使用液氮。使用本无血清细胞冻存液，可直接置于-80℃长期保存。也可以在-80℃放置至少24小时后转移至液氮中保存，无须程序性降温步骤或使用程序降温盒，使用非常便捷。

本产品化学成分明确，不含血清，使用安全。本产品使用限定化学成分的配方，含氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖、DMSO等各种细胞所必须的营养成分和冷冻保护剂，含酚红，不含常用的胎牛血清、不含任何动物来源的蛋白质，减少因血清批次带来的冻存效果差异，也能降低各种病毒、霉菌和支原体等微生物对细胞的污染风险，确保细胞安全，同时也减少外源蛋白对细胞正常生长和分化的影响。

本产品冻存的细胞复苏存活率高。本产品配方经过优化，使用本产品冻存的细胞复苏后的存活率高，并能保持良好的细胞活性。经过测试，对于冻存复苏存活率较高的HeLa (人宫颈癌细胞) (C6330)、BEAS-2B (人正常肺上皮细胞) (C6106)等细胞，-80℃冻存一年后，复苏存活率高于90%，对于冻存复苏存活率较低的Jurkat (人T淋巴细胞瘤细胞) (C6456)、L929 (小鼠成纤维细胞)等细胞，-80℃冻存一年后，复苏存活率高于65%，与使用含FBS的冻存液效果基本一致，与同类型无血清细胞冻存液相比，效果基本一致或更好。本产品冻存的某些细胞，甚至置于-20℃冻存6个月，复苏存活率高于50%。本产品(BeyoAOF™ Freezing Medium) (C0210B)与含FBS的冻存液(Normal Freezing Medium)、国外同类产品Competitor G在-80℃冻存一年的复苏存活率比较参见图1。

图1.BeyoAOF™无血清细胞冻存液的复苏存活率效果图。使用本产品(BeyoAOF™ Freezing Medium)与含FBS的细胞冻存液(C0210) (Normal Freezing Medium)、国外同类产品Competitor G三种不同的细胞冻存液，将HeLa、BEAS-2B、Jurkat、L929四种细胞直接置于-80℃冻存一年后，检测复苏存活率。实际结果会因实验条件、细胞状态等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

如果每管细胞使用1ml细胞冻存液，50ml和200ml的本产品可分别用于约50管和200管细胞的冻存。

-20℃保存，一年有效。4℃保存，3个月有效。

对于某些特殊细胞或特别珍贵的细胞，建议同时使用常规的含FBS的冻存液进行对比测试，确认复苏存活率后再使用本产品。

本产品含DMSO，对DMSO敏感的细胞，建议进行冻存的预实验。

对于不太珍贵的常见细胞，推荐使用本无血清细胞冻存液可直接置于-80℃长期保存，这样使用和操作更加便捷。但对于比较珍贵的细胞或者复苏效率比较低的细胞，如果希望获得更好的冻存和复苏效果，建议使用BeyoCool™细胞冻存盒(FCFC012)等进行程序性降温冻存，并在-80℃放置至少24小时后转移至液氮中保存。

使用前需确保细胞冻存液完全融化，并轻轻混匀。融化后的细胞冻存液置于4℃保存，三个月内有效。

本产品采用了细胞培养常用的碳酸氢根缓冲体系，如果敞口时间过长会导致二氧化碳的释放，从而导致pH值逐渐升高，敞口时间过长后甚至导致溶液颜色发生变化。由于溶液中含有钙离子和镁离子，在pH过高的情况下，有可能出现碳酸钙、氢氧化钙和氢氧化镁的沉淀。使用过程中请注意尽量减少敞口的时间，使用完毕后一定要盖紧盖子保存。如有必要可以适当分装使用，以避免pH的升高。如果使用一段时间后出现少量沉淀，经测试对冻存效果并无影响。

请确保冻存前细胞生长情况良好，冻存时活细胞比例通常宜大于90%。

加入细胞冻存液并混匀后须尽快移入-80℃超低温冰箱内保存。-80℃超低温冰箱内保存时，请将冻存细胞置于-80℃超低温冰箱内部，避免频繁打开冰箱门导致门边的温度发生变化而使冻存效果变差。

请使用耐受有机溶剂的marker笔(Alcohol Resistant Marker)进行标记，以防做的标记被酒精或异丙醇等有机溶剂擦掉，而不能辨识。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。