碧云天生产的DH10Bac甘油菌，是收集生长在对数期的DH10Bac菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。可以直接划平板或小量、大量培养。

DH10Bac是昆虫杆状病毒Bac-to-Bac系统中常用的同源重组大肠杆菌菌株。该菌株含有杆状病毒穿梭载体(baculovirus shuttle vector) bMON14272(俗称bacmid，其含有一个转座反应必须的mini-attTn7重组位点)和一个辅助质粒pMON7124(用于表达转座所需的转座蛋白)。DH10Bac主要用作pFastBac等类似载体转化的宿主菌株。当pFastBac重组质粒转化进入DH10Bac细胞后，pFastBac载体上的mini-Tn7位点和DH10Bac宿主菌中bacmid上的mini-attTn7位点之间发生转座(transposition)，产生重组的bacmid。重组的bacmid在转染昆虫细胞后可产生含有重组子的杆状病毒，后者进一步感染昆虫细胞后即可启动外源重组蛋白的表达。

DH10Bac宿主包含的bacmid bMON14272含小型F复制子，卡那霉素抗性基因，mini-attTn7位点和lacZα互补因子(可通过蓝白斑筛选)；辅助质粒pMON7124包含四环素抗性和tnsABCD区域，该区域表达转座反应所需的转座蛋白。携带T7转座原件(Tn7 element)的供体质粒pFastBac (donor pFastBac plasmid)带有庆大霉素抗性基因，杆状病毒多角体启动子，多克隆位点区域和SV40的多腺苷酸化信号。

使用碧云天超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)制备DH10Bac感受态细胞，转化在多克隆位点插入目的基因的pFastBac重组质粒产生重组的bacmid，利用碧云天生产的杆状病毒穿梭载体bacmid小量抽提试剂盒(D0031)提取重组bacmid DNA，将重组bacmid DNA转染进入昆虫细胞(推荐使用碧云天生产的LipoInsect™昆虫细胞转染试剂C0551)产生重组杆状病毒，扩增重组的杆状病毒并用其感染昆虫细胞，就可以大规模表达重组目的蛋白。

DH10Bac菌株具有卡那霉素抗性和四环素抗性，pFastBac质粒具有庆大霉素(Gentimicin)抗性和氨苄青霉素抗性。

DH10Bac菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG / pMON14272 / pMON7124。

重组后的克隆用蓝白斑进行筛选，重组成功的克隆在含有卡那霉素和四环素抗性的IPTG/X-Gal LB平板上呈现为白色菌落。

本菌株可以使用常规的LB培养基或SOC培养基进行培养。

关于碧云天不同甘油菌菌种的比较和选择，可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/strain.htm

-20℃保存，至少3个月有效。-80℃可以长期保存。

使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。