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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2778-1μg | pCMV-N-HA-Hyg | 1μg | 888.00元 |
| D2778-100μg | pCMV-N-HA-Hyg | 100μg | 1169.00元 |
pCMV-N-HA-Hyg是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有HA标签(HA Tag)的目的蛋白的表达质粒。该质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5′端含有一个编码HA标签的序列，可以表达含有HA标签的融合蛋白，因此可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白，从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。
pCMV-N-HA-Hyg质粒为氨苄青霉素抗性和潮霉素B (Hygromycin B)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌，而在转染哺乳动物细胞后，可利用其Hygromycin B抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Hygromycin B (ST1389)可以从碧云天购买。
Hygromycin B是来源于吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的一种氨基糖苷类抗生素，可通过中断易位并增加80S核糖体上的错误翻译而抑制蛋白质的合成，从而杀死原核或真核细胞。大肠杆菌来源的Hygromycin B抗性基因(hyg或hph)所编码的Hygromycin B磷酸转移酶可将Hygromycin B磷酸化，导致其失活，从而使细胞对Hygromycin B产生抗性。因此，Hygromycin B可用于筛选成功转染Hygromycin B抗性基因的原核或真核细胞。
Hygromycin B用于细胞筛选的浓度范围是100~1000μg/ml，实际应用时应针对不同的细胞系测试Hygromycin B的浓度梯度，确定最佳使用浓度。
pCMV-N-HA-Hyg质粒(5588bp)的图谱如下：
pCMV-N-HA-Hyg质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| Ampicillin resistance ORF | 63-923 |
| CMV promoter | 1405-1608 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 1654-1672 |
| HA tag | 1712-1738 |
| Multiple cloning site (XmaI-ApaI) | 1741-1813 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 1859-1877 |
| SV40 polyA signal | 2151-2272 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2279-2734 |
| SV40 promoter | 2867-3224 |
| Hygromycin resistance ORF | 3259-4284 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 4516-4563 |
| pUC origin | 4892-5480 |
pCMV-N-HA-Hyg的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2778 pCMV-N-HA-Hyg.pdf
pCMV-N-HA-Hyg中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA-Hyg)包括：
| Afe I | Afl II | Age I | Ale I | Asc I | Bae I |
| BbsI | BbvC I | Blp I | BmgB I | Bpu10 I | Bsg I |
| BsiW I | BsmB I | BspQ I | BsrG I | BssH II | BstE II |
| BstX I | BstZ17 I | EcoN I | Esp3 I | Fse I | Kas I |
| Msc I | Nar I | Nru I | PluT I | Pme I | Pml I |
| PpuM I | PspX I | Sac I | Sap I | Sbf I | Sfo I |
| SgrA I | Swa I | Xcm I |
pCMV-N-HA-Hyg中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA-Hyg once)包括：
| AccI | GT`MK,AC | 1779 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1790 |
| ApaI | G,GGCC`C | 1808 | PciI | A`CATG,T | 5536 |
| AsiSI | GCG,AT`CGC | 3621 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3763 |
| BamHI | G`GATC,C | 1748 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 1693 |
| BcgI | NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 639 | PshAI | GACNN|NNGTC | 3286 |
| BclI | T`GATC,A | 2044 | PspOMI | G`GGCC,C | 1808 |
| BglII | A`GATC,T | 1784 | PstI | C,TGCA`G | 1760 |
| BsaXI | NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 2434 | PvuII | CAG|CTG | 2885 |
| BseRI | GAGGAG(N)8,NN` | 3203 | RsrII | CG`GWC,CG | 3667 |
| BspDI | AT`CG,AT | 3227 | SacI | G,AGCT`C | 1685 |
| BstBI | TT`CG,AA | 4300 | SalI | G`TCGA,C | 1778 |
| ClaI | AT`CG,AT | 3227 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3159 |
| CspCI | NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 1414 | SmaI | CCC|GGG | 1743 |
| EarI | CTCTTCN`NNN, | 931 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | SpeI | A`CTAG,T | 1802 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1766 | SrfI | GCCC|GGGC | 1743 |
| EcoRV | GAT|ATC | 1774 | StuI | AGG|CCT | 3208 |
| HindIII | A`AGCT,T | 1754 | TspMI | C`CCGG,G | 1741 |
| HpaI | GTT|AAC | 2150 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3763 |
| MfeI | C`AATT,G | 2137 | XbaI | T`CTAG,A | 1796 |
| MluI | A`CGCG,T | 2273 | XhoI | C`TCGA,G | 1790 |
| NdeI | CA`TA,TG | 1274 | XmaI | C`CCGG,G | 1741 |
| NotI | GC`GGCC,GC | 1701 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
pCMV-N-HA-Hyg质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
T7 primer (1859-1877): 5' TAATACGACTCACTATAGG 3'
pCMV-N-HA-Hyg的全序列信息:D2778 pCMV-N-HA-Hyg-seq.txt
不同真核表达质粒的比较和选择，以及标签和抗性的考虑可以参考如下网页：
https://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001001001004
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2778-1μg | pCMV-N-HA-Hyg | 1μg |
| D2778-100μg | pCMV-N-HA-Hyg | 100μg |
| － | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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