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碧云天 Lambda Exonuclease(Lambda核酸外切酶)(D7084L)

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  • 商品名称:碧云天 Lambda Exonuclease(Lambda核酸外切酶)(D7084L)
  • 商品编号:D7084L
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2022-12-12
  • 商品毛重:100.100千克
  • 库存: 1627
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7084S Lambda Exonuclease 1KU 398.00元
D7084M Lambda Exonuclease 5KU 1528.00元
D7084L Lambda Exonuclease 25KU 5988.00元

碧云天生产的Lambda Exonuclease,即λ Exonuclease,λ核酸外切酶或Lambda核酸外切酶,是一种特异性作用于DNA的5´→3´核酸外切酶,能选择性地沿5´→3´方向消化5’端磷酸化的双链DNA,对单链DNA和5’端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低,不能从DNA的切刻或缺口处起始消化[1, 2]。 Lambda Exonuclease对5´-0H端的切割速度比5´-P端慢约20倍;对单链DNA的酶切速度比双链DNA慢约100倍。Lambda Exonuclease是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组酶。

碧云天生产的Lambda Exonuclease对一条链带有5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果参考图1。

图1. 碧云天生产的Lambda Exonuclease (D7084)对仅一条链带有5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果图。在20µl反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4, 2.5mM MgCl2, 50µg/ml BSA)中,加入5pmol 26bp双链线性DNA片段(其中一条核酸链带有5´磷酸化修饰,另一条链无5´磷酸化修饰),以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Lambda Exonuclease,37℃孵育30分钟进行反应,反应完毕后加入10mM EDTA终止反应,并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μl反应产物,加入2μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1X TBE作为电泳液,180V电泳40分钟,之后用D0128/D0130 NA-Red (1:2000稀释)室温染色7分钟,即可拍照观察结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的降解带有5´磷酸化修饰的双链线性DNA的效果。图中效果仅供参考。

碧云天生产的Lambda Exonuclease对5´磷酸化修饰的单链线性DNA消化的效果参考图2。

图2. 碧云天生产的Lambda Exonuclease (D7084)对5´磷酸化修饰的单链线性DNA消化的效果图。在20µl反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4, 2.5mM MgCl2, 50µg/ml BSA)中,加入10pmol 26nt单链线性DNA片段(5´磷酸化修饰),以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Lambda Exonuclease,37℃孵育30分钟进行反应,反应完毕后加入10mM EDTA终止反应,并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μl反应产物,加入2μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1X TBE作为电泳液,180V电泳40分钟;之后用D0128/D0130 NA-Red (1:2000稀释)室温染色7分钟,即可拍照观察结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的降解带有5´磷酸化修饰的单链线性DNA的效果。图中效果仅供参考。

碧云天生产的Lambda Exonuclease对无5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果参考图3。

图3. 碧云天生产的Lambda Exonuclease (D7084)对无5´磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果图。在20µl反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4, 2.5mM MgCl2, 50µg/ml BSA)中,加入5pmol 26bp双链线性DNA片段(无5´磷酸化修饰),以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Lambda Exonuclease,37℃孵育30分钟进行反应,反应完毕后加入10mM EDTA终止反应,并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μl反应产物,加入2μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1X TBE作为电泳液,180V电泳40分钟;之后用D0128/D0130 NA-Red (1:2000稀释)室温染色7分钟,即可拍照观察结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,均不能有效的消化无5´磷酸化修饰的双链线性DNA。图中效果仅供参考。

用途:生成单链PCR产物用于DNA测序;DNA单链构象多态性(SSCP)分析;滚环扩增;从双链DNA片段生成单链DNA;PCR产物的克隆;质粒制备净化。

来源:纯化自携带编码大肠杆菌Lambda核酸外切酶基因的E.coli重组菌株。

酶活性: Lambda exonuclease is a highly processive 5'→3' exodeoxyribonuclease, selectively digests the 5’-phosphorylated strand of double-stranded DNA, exhibits low activity on single-stranded DNA and non-phosphorylated DNA, and has limited activity at gaps in DNA [1, 2]。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 10nmol of acid-soluble deoxyribonucleotide from double-stranded substrate in a total reaction volume of 50μl in 30minutes at 37℃ in 1X Lambda Exonuclease Reaction Buffer with 1μg sonicated duplex [3H]-DNA.

纯度:不含除Lambda Exonuclease之外的其它种类的外切酶,不含内切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。

酶储存液:25mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, (pH8.0 @25℃)。

10X Reaction Buffer: 670mM Glycine-KOH, 25mM MgCl2, 500µg/ml BSA, (pH9.4 @25℃)。

失活或抑制:加入EDTA至终浓度为至少10mM,75℃孵育10分钟可使Lambda Exonuclease失活。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7084S-1 Lambda Exonuclease (5U/μl) 200μl
D7084S-2 10X Reaction Buffer 1ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7084M-1 Lambda Exonuclease (5U/μl) 1ml
D7084M-2 10X Reaction Buffer 5ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7084L-1 Lambda Exonuclease (5U/μl) 5ml
D7084L-2 10X Reaction Buffer 25ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,2年有效。

注意事项:

Lambda Exonuclease的最佳反应温度是37℃,在75℃条件下孵育10分钟可使其完全失活。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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