碧云天生产的BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型)，即BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, Resistant to Reductants and Chelators)，俗称镍柱，是一种新型的能耐受高流速和高压力的可以兼容还原剂和螯合剂，并能简单、快速、高效并且高特异性地纯化His标签蛋白纯化介质。

通常带有6个组氨酸标签的重组蛋白(6xHis-tagged recombinant protein)或带有6个以上连续组氨酸标签的重组蛋白，被称为His标签蛋白。蛋白样品溶液通过BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型)时，重组蛋白His标签上的组氨酸残基能特异性地结合到BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型)中的镍离子上，其它蛋白则不能被结合。洗涤后，His标签重组蛋白可在非变性条件下被洗脱，从而被分离纯化。

本产品对His标签重组蛋白的亲和力强、选择性高、结合容量大，使用本产品可以获得高纯度的His标签重组蛋白，可用于简单、快速、高效地纯化细菌、哺乳动物细胞、昆虫及杆状病毒等多种表达系统中表达的His标签重组蛋白。纯化的蛋白可以用于结构和功能研究、抗体制备、蛋白与蛋白相互作用、蛋白与核酸相互作用等方面的研究。

本产品采用了一种高度交联的6%琼脂糖凝胶(Beyorose™ 6 Fast Flow，简称Beyorose™ 6FF，与Sepharose 6 Fast Flow简称Sepharose 6FF的性能基本一致)为基质，并使用了进一步优化的接臂和镍离子螯合技术，和目前市售的大多数Ni-NTA agarose或类似产品相比，非特异性蛋白结合显著降低，耐受压力强，镍离子螯合非常稳定。和同类产品相比，本产品由于镍离子基本不会流失，重复使用本纯化介质时不需要重新装载镍离子。

Ni-NTA agarose以及绝大多数类似的镍柱产品不能耐受蛋白样品中常见浓度的还原剂如二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇等以及常见浓度的螯合剂如EDTA等，但本产品可以很好地耐受DTT等还原剂以及EDTA等螯合剂。本产品可耐受20mM DTT等还原剂，以及20mM EDTA等螯合剂。这为需要添加还原剂或螯合剂的蛋白样品的纯化提供了可能性。本产品不兼容8M尿素和6M盐酸胍。对于包涵体蛋白的纯化，在采用8M尿素或6M盐酸胍溶解蛋白的情况下，需要通过透析去除尿素和盐酸胍后才能使用本产品进行His标签蛋白的纯化。

本产品已经螯合了镍离子，呈蓝色，凝胶的颗粒直径为45-165μm。可耐受的最大压力为0.3MPa，约合43.5psi。采用固定流速进行蛋白纯化时的最大流速为300cm/h。

本产品可以高容量、高特异性地结合His标签蛋白。最大蛋白结合量为20-30mg蛋白/毫升凝胶。实际使用时的最大结合量取决于待纯化的His标签重组蛋白的分子量大小，分子量越大则最大结合容量越大，分子量越小则最大结合容量越小。对于分子量为50kD的蛋白，每毫升凝胶的实际最大纯化量约为6-10mg，对于分子量为100kD的蛋白，每毫升凝胶的实际最大纯化量约为12-20mg。但对于分子量相同的蛋白，也会因为蛋白本身特性的不同，结合的最大容量也会有所不同。

本产品储存在20%乙醇中，每10ml总体积中5ml为凝胶，5ml为液体。使用时宜把凝胶充分重悬后再吸取。

每10ml本产品最多可纯化100-150mg带有His标签重组蛋白。对于分子量为50kD的带有His标签重组蛋白，每10ml本产品实际最多可纯化约30-50mg蛋白。

4℃保存，至少一年有效。

请勿在-20℃或更低温度冷冻保存本产品。

本产品使用过程中，缓冲试剂如Tris、HEPES、MOPS等的浓度不宜超过100mM，EDTA浓度不宜超过20mM，SDS和sarkosyl的浓度不宜超过0.3%，Triton、Tween、NP-40的浓度不宜超过2%，脱氧胆酸钠、CHAPS的浓度不宜超过1%，组氨酸浓度不宜超过20mM，钙离子浓度不宜超过5mM，钠离子和镁离子浓度可以高达2M，甘油浓度可以高达50%。其它未提及试剂的兼容性可以参考上述试剂，但还有待实验验证。

保存和纯化过程中应始终保持凝胶湿润。

碧云天有多种不同容量的亲和层析柱空柱管(FCL01/FCL03/FCL06/FCL12/FCL30/FCL60)，可以和本产品配合使用。

若离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。

蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解。为有效抑制蛋白降解，可以在裂解液中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如碧云天的P1030/P1031 蛋白酶抑制剂混合物(His-Tag蛋白纯化用, 100X)。

若使用本说明书提供的条件无法达到理想的纯化效果，可尝试改变洗涤液和洗脱液中咪唑的浓度和(或)pH，以达到最优效果。

如果目的蛋白纯化必须使用变性剂，推荐使用碧云天生产的P2233 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)/P2236 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐变性剂型)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。