碧云天生产的His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型)，His-tag Protein Purification Kit (Denaturant-resistant)，俗称镍柱试剂盒，是一种采用了新型的BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)的可以兼容高浓度变性剂(8M尿素或6M盐酸胍)，并能简单、快速、灵活、高效并且高特异性地在非变性或变性条件下纯化His标签蛋白的试剂盒。
使用便捷，提供了空柱管和配套试剂。试剂盒提供了His标签蛋白所需的相关试剂和亲和层析柱空柱管，为His标签蛋白的纯化带来了极大的便利。
用途广泛，非变性和变性条件都可以使用。本试剂盒不仅可以用于在非变性条件纯化His标签蛋白，也可用于在变性条件纯化His标签蛋白。本试剂盒提供了非变性和变性条件下纯化His标签蛋白所需的不同的裂解液、洗涤液和洗脱液，可以很好地满足不同实验的需要。很多情况宜优先选择非变性条件进行目的蛋白的裂解。如果发现非变性条件目的蛋白的裂解效果欠佳，但目的蛋白的表达量能达到预期时，首先宜考虑调整目的蛋白的诱导表达条件，例如调整IPTG等诱导剂的浓度和诱导时的温度等。如果调整诱导条件后在非变性条件下仍然裂解效果欠佳，此时宜考虑选择变性条件进行裂解、洗涤和洗脱。
变性条件溶解性好，洗脱样品可以直接PAGE检测。试剂盒配套提供的变性裂解液、变性洗脱液和变性洗涤液中均含有8M尿素，可以有效促使蛋白变性和溶解；最终洗脱下来的目的蛋白无需透析即可用于PAGE检测。最终纯化获得的目的蛋白可以通过透析去除尿素后用于后续特定用途。
通常带有6个组氨酸标签的重组蛋白(6X His-tagged recombinant protein)或带有6个以上连续组氨酸标签的重组蛋白，被称为His标签蛋白。蛋白样品溶液通过BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)时，重组蛋白His标签上的组氨酸残基能特异性地结合到BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)中的镍离子上，其它蛋白则不能被结合。洗涤后，His标签重组蛋白可在非变性条件下被洗脱，从而被分离纯化。
优质镍柱，亲和力强、选择性高、结合容量大。BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)对His标签重组蛋白的亲和力强、选择性高、结合容量大，可以获得高纯度的His标签重组蛋白，可用于简单、快速、高效地纯化细菌、哺乳动物细胞、昆虫及杆状病毒等多种表达系统中表达的His标签重组蛋白。纯化的蛋白可以用于结构和功能研究、抗体制备、蛋白与蛋白相互作用、蛋白与核酸相互作用等方面的研究。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)采用了一种高度交联的6%琼脂糖凝胶(Beyorose CL-6B，与Sepharose CL-6B性能基本一致)为基质，并使用了进一步优化的接臂和镍离子螯合技术，和目前市售的大多数Ni-NTA agarose或类似产品相比，非特异性蛋白结合显著降低，耐受压力强，镍离子螯合非常稳定。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)已经螯合了镍离子，呈蓝绿色，凝胶的颗粒直径为45-165µm。可耐受的最大压力为0.025MPa，约合5.8psi。采用固定流速进行蛋白纯化时的推荐流速为0.5ml/min。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)可以高容量、高特异性地结合His标签蛋白。最大蛋白结合量为25-35mg蛋白(分子量为~55kD)/毫升凝胶。实际使用时的最大结合量取决于待纯化的His标签重组蛋白的分子量大小，分子量越大则最大结合容量越大，分子量越小则最大结合容量越小。但对于分子量相同的蛋白，也会因为蛋白本身特性的不同，结合的最大容量也会有所不同。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)储存在20%乙醇中。本产品包装体积中50%为凝胶，例如10ml总体积中5ml为凝胶，5ml为液体。使用时宜把凝胶充分重悬后再吸取。
一个包装的本产品足够进行10次His标签重组蛋白纯化，每次细菌沉淀的湿重约为1克。每次蛋白(~55kD)的最大纯化量为12-18mg，具体的最大纯化量和蛋白分子量有关。在不使用亲和层析柱空柱管的情况下，参考本说明书本试剂盒足够进行500次的小量His标签蛋白纯化。
包装清单：

保存条件：
4℃保存，至少一年有效。除BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)外，其余均可以-20℃保存。
注意事项：
请勿在-20℃或更低温度冷冻保存BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)使用过程中，缓冲试剂如Tris、HEPES、MOPS等的浓度不宜超过100mM， SDS和sarkosyl的浓度不宜超过0.3%，Triton、Tween、NP-40的浓度不宜超过2%，脱氧胆酸钠、CHAPS的浓度不宜超过1%，组氨酸浓度不宜超过20mM，钙离子浓度不宜超过5mM，钠离子和镁离子浓度可以高达2M，盐酸胍浓度可以高达6M，尿素浓度可以高达8M，甘油浓度可以高达50%。本产品不能耐受还原剂、螯合剂和强酸强碱。其它未提及试剂的兼容性可以参考上述试剂，但还有待实验验证。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)保存和纯化过程中应始终保持凝胶湿润。
若离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45µm的滤膜过滤。
蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解。为有效抑制蛋白降解，可以在裂解液中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如碧云天的P1030/P1031 蛋白酶抑制剂混合物(His-Tag蛋白纯化用, 100X)。
若使用本说明书提供的条件无法达到理想的纯化效果，可尝试改变洗涤液和洗脱液中咪唑的浓度和(或)pH，以达到最优效果。
如果目的蛋白纯化必须使用螯合剂或还原剂，推荐使用碧云天生产的P2226 His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。