碧云天生产的BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐变性剂型)，即BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, Denaturant-resistant)，是一种能耐受高流速和高压力的耐变性剂型的His标签蛋白纯化介质，俗称镍柱。本产品是一种新型的能耐受高流速和高压力的可以兼容尿素和盐酸胍等强蛋白变性剂，从而不仅可以在非变性条件下也可以在变性条件下简单、快速、高效并且高特异性地纯化His标签蛋白的纯化介质。

通常带有6个组氨酸标签的重组蛋白(6xHis-tagged recombinant protein)或带有6个以上连续组氨酸标签的重组蛋白，被称为His标签蛋白。蛋白样品溶液通过BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐变性剂型)时，重组蛋白His标签上的组氨酸残基能特异性地结合到BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐变性剂型)中的镍离子上，其它蛋白则不能被结合。洗涤后，His标签重组蛋白可在非变性条件下或者变性条件下被洗脱，从而被分离纯化。

本产品对His标签重组蛋白的亲和力强、选择性高、结合容量大，使用本产品可以获得高纯度的His标签重组蛋白，可用于简单、快速、高效地纯化细菌、哺乳动物细胞、昆虫及杆状病毒等多种表达系统中表达的His标签重组蛋白。纯化的蛋白可以用于结构和功能研究、抗体制备、蛋白与蛋白相互作用、蛋白与核酸相互作用等方面的研究。

本产品采用了一种高度交联的6%琼脂糖凝胶(Beyorose™ 6 Fast Flow，简称Beyorose™ 6FF，与Sepharose 6 Fast Flow简称Sepharose 6FF的性能基本一致)为基质，并使用了进一步优化的接臂和镍离子螯合技术，和目前市售的同类产品相比，非特异性蛋白结合显著降低。

本产品可以耐受8M尿素或6M盐酸胍，可用于非变形条件和变性条件下His标签蛋白的纯化。DTT、β-巯基乙醇等还原剂会还原螯合结合的镍离子，而EDTA/EGTA等二价离子强螯合剂则会使本产品脱镍，因此在蛋白样品或者纯化过程所使用的溶液中不能含有还原剂和螯合剂。如需在强还原剂如DTT/β-巯基乙醇或螯合剂EDTA/EGTA存在的条件下纯化蛋白，推荐使用碧云天的耐受还原剂和螯合剂的P2210/P2218/P2220 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型)/P2221 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型)。

本产品已经螯合了镍离子，呈蓝绿色，凝胶的颗粒直径为45-165μm。可耐受的最大压力为0.3MPa，约合43.5psi。采用固定流速进行蛋白纯化时的最大流速为300cm/h。

本产品可以高容量、高特异性地结合His标签蛋白。最大蛋白结合量约为25-35mg蛋白(分子量为55kD的蛋白)/毫升凝胶。实际使用时的最大结合量主要取决于待纯化的His标签重组蛋白的分子量大小，分子量越大则最大结合容量越大，分子量越小则最大结合容量越小。但对于分子量相同的蛋白，也会因为蛋白本身特性的不同，结合的最大容量也会有所不同。

本产品储存在20%乙醇中。本产品包装体积中50%为凝胶，例如10ml总体积中5ml为凝胶，5ml为液体。使用时宜把凝胶充分重悬后再吸取。

每10ml包装的本产品最多可纯化100-200mg带有His标签的重组蛋白(分子量为55kD的蛋白)，分子量更大的蛋白结合容量会更大一些。

4℃保存，至少一年有效。

请勿在-20℃或更低温度冷冻保存本产品。

本产品使用过程中，缓冲试剂如Tris、HEPES、MOPS等的浓度不宜超过100mM，SDS和sarkosyl的浓度不宜超过0.3%，Triton X-100、Tween-20、NP-40的浓度不宜超过2%，脱氧胆酸钠、CHAPS的浓度不宜超过1%，组氨酸浓度不宜超过20mM，钙离子浓度不宜超过5mM，钠离子和镁离子浓度可以高达2M，盐酸胍浓度可以高达6M，尿素浓度可以高达8M，甘油浓度可以高达50%。本产品不能耐受还原剂、螯合剂和强酸强碱。其它未提及试剂的兼容性可以参考上述试剂，但还有待实验验证。

保存和纯化过程中应始终保持凝胶湿润。

碧云天有多种不同容量的亲和层析柱空柱管(FCL01/FCL03/FCL06/FCL12/FCL30/FCL60)，可以和本产品配合使用。

若离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。

蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解。为有效抑制蛋白降解，可以在裂解液中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如碧云天的P1030/P1031 蛋白酶抑制剂混合物(His-Tag蛋白纯化用, 100X)。

若使用本说明书提供的条件无法达到理想的纯化效果，可尝试改变洗涤液和洗脱液中咪唑的浓度和(或)pH，以达到最优效果。

如果目的蛋白纯化必须使用螯合剂或还原剂，推荐使用碧云天生产的P2210/P2218/P2220 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型)/P2221 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。