碧云天的BeyoGel™大分子量蛋白预制胶(Tris-Acetate) (BeyoGel™ Tris-Acetate Precast PAGE Gel for High Molecular Weight Protein)是一种主要用于大分子量蛋白(40-500kDa)检测的使用安全、便捷、高品质的常规尺寸聚丙烯酰胺预制凝胶，采用Tris-Acetate SDS (SDS-PAGE)或Tris-Glycine (Native-PAGE)电泳缓冲系统可以分别进行变性和非变性蛋白凝胶电泳，仅需约60分钟即可完成电泳并获得非常平整锐利的条带。本预制胶有1.5厘米高的浓缩胶，具有非常优良的分离效果，电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利，几乎没有边缘效应；同时本预制胶胶板为玻璃材质，减少了对蛋白的非特异性吸附，电泳效果非常好，达到甚至超过了自配PAGE胶的电泳效果；兼容市场上主流的小型电泳槽，常用于PAGE和Western检测。

碧云天的BeyoGel™大分子量蛋白预制胶(Tris-Acetate)提供3-8%浓度的梯度胶和7%浓度的固定浓度胶，并有10孔和15孔两种孔数选择。如果有较大量的特殊浓度需求，碧云天可提供定制服务。每种预制胶的最佳分离范围请参考下表：

本预制胶含有1.5厘米高的4%浓缩胶，可以有效确保获得非常锐利的条带。

本预制胶丙烯酰胺(Acrylamide)与甲叉丙烯酰胺(Bisacrylamide)的比例为29:1，凝胶厚度为1.5mm。加样孔数为10孔的最大上样量为60μl，加样孔数为15孔的最大上样量为30μl。胶板尺寸：宽×高×厚度为98×84×4.1mm；凝胶尺寸：宽×高×厚度为81×74×1.5mm。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)技术广泛用于蛋白质、核酸及蛋白质-核酸复合物的分离纯化、检测、鉴定、分子量分析等实验，是生命科学研究中最基本的实验技术之一。常见的Western印迹(Western blot)检测就是基于PAGE的。Glycine-SDS-PAGE (也被称为Laemmli-SDS-PAGE，基于Tris-Glycine缓冲系统)和Tricine-SDS-PAGE (基于Tris-Tricine缓冲系统)是广泛应用的将蛋白质按照分子量大小分离的方法[1]。Tricine-SDS-PAGE可以很好地分离小于30kDa的蛋白质，而Glycine-SDS-PAGE被建议用于大于30kDa的蛋白。不同体系分离蛋白质的特性与Glycine和Tricine的pKa值有关，不同大小的蛋白质在不同的缓冲体系中拥有不同的电泳迁移率，且特定范围内的蛋白质分辨率较高。因此，如果需要分离大分子量蛋白，就需要选择合适的电泳系统[2]。同时，也建议使用由下至上丙烯酰胺浓度降低的梯度胶[3]。目前研究中常用Tris-Acetate凝胶系统分离大分子量蛋白。在Tris-Acetate凝胶系统中，Acetate(-)来自凝胶缓冲液，相较于系统中其它的阴离子，Acetate(-)对阳极具有极高的亲和力，因此可作为前导离子(Leading ion)。凝胶缓冲液中含有Tris(+)和Acetate(-)，pH为7.0，使凝胶具有很高的分辨率。电泳缓冲液中含Tris(+)、Tricine(-)和十二烷基硫酸盐(Dodecylsulfate, DS)，其中Tricine(-)作为尾随离子(Tailing ion)。电泳缓冲液pH为8.24，减少了蛋白修饰，使条带更锐利。对高分子量蛋白进行分离的结果也表明，Tris-Acetate凝胶分离效果好、转移效率高、灵敏度高、分辨率佳。此外，Tris-Acetate凝胶也被报道可以作为一种稳定的、经济高效的研究蛋白质寡聚化的工具，仅使用单一凝胶即可提供出色的蛋白质寡聚化结果[4]。

碧云天的BeyoGel™大分子量蛋白预制胶(Tris-Acetate)使用中性pH的Tris-Acetate缓冲液制备，不含SDS，既可用于变性蛋白电泳，也可用于非变性蛋白电泳。

推荐使用碧云天专门为本预制胶研制的配套电泳液，或参考使用说明自行配制相应的电泳液。对于变性蛋白电泳，推荐使用BeyoGel™ Tris-Acetate SDS Running Buffer (20X) (P0749)；对于非变性蛋白电泳，推荐使用非变性PAGE电泳液(Tris-Gly, Powder) (P0014F/P0014G)。

本预制胶电泳后可以使用Tris-Glycine缓冲系统的转膜液进行转膜，但需降低转膜液中乙醇或甲醇浓度(至5%)，推荐使用Western转膜液(P0021A或P0021B)。

关于10孔和15孔预制胶的选择：需要检测的样品数量多或者需要定量时，推荐使用15孔预制胶，通量更大、更便于进行较多样品的定量统计分析；需要获得非常漂亮的代表性图片时，推荐使用10孔预制胶，10孔预制胶获得的条带更加平整和锐利。

本产品使用安全、便捷。本预制胶无需配制，即开即用，去掉梳子即可上样，而传统的PAGE配制凝胶繁琐费时，并且制胶时还会接触有毒和刺激性试剂。

本产品质量稳定。本预制胶采用高品质玻璃胶板，和塑料胶板相比，大大减少了胶板对蛋白的吸附，电泳效果更好。本产品流水线灌注，品质稳定可靠，重复性好，不同批次的产品一致性高。

本产品电泳效果好。本预制胶的蛋白质分离效果极佳，蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利，转膜效率高。

本产品电泳槽兼容性好。本预制胶兼容市场上主流的小型电泳槽，如碧云天的MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(E6001/E6005)、Bio-Rad公司的Mini-PROTEAN® Tetra Cell电泳槽、Life公司的XCell SureLock® Mini-Cell电泳槽(需与碧云天可免费提供的特制挡板配合使用)、以及上海天能、北京六一等的mini胶电泳槽或其它胶板宽度在10厘米的电泳槽。

本产品电泳时间短。本预制胶推荐的变性电泳电压和电泳时间为150V 50-70分钟；非变性电泳电压和电泳时间为150V 90-180分钟。完成电泳后可获得非常平整和锐利的电泳条带。具体的电泳时间可以根据溴酚蓝的电泳位置或实验的具体需求进行确定。

本产品取出凝胶极为便捷。只需用刀片在玻璃胶板一侧轻轻划一下即可，并且玻璃胶板打开极为方便，无需特殊的起撬工具。

本预制胶属于特殊用途预制胶。碧云天的特殊用途预制胶的比较和选择可以参考碧云天的相关网页：

http://www.beyotime.com/support/special-precast-page-gel.htm。

4℃保存，6个月有效。切勿置于0℃以下冷冻。

由于本预制胶保质期较短，需新鲜制备，在您确认订购后约3-5个工作日才能发货。

本预制胶不能置于0℃以下冷冻，否则凝胶会冻裂。

内槽电泳液和转膜液建议新鲜配制，试剂纯度不够、反复使用或长期放置的缓冲液会降低电泳效果。

本预制胶为了兼容几乎所有厂家的小型凝胶电泳槽，所以改进了与电泳槽U型硅橡胶密封条的吻合结构(如碧云天、Bio-Rad等公司的电泳槽)。建议在电泳时须将具有突起结构的U型硅橡胶密封条取出后反过来安装，使其没有突起的平滑面朝外，从而防止漏液，见下图。一般内槽电泳液加满，外槽电泳液没过电泳槽底部的阳极即可，并且电泳结束后的电泳缓冲液可以作为外槽缓冲液重复使用1-2次。另外，部分公司都已经配套无突起结构的U型硅橡胶密封条，使用这样的U型硅橡胶密封条就不会出现内外槽之间的漏液现象。

图1. 碧云天、Bio-Rad等公司的电泳槽U型硅橡胶密封条的突起结构图。由于碧云天的BeyoGel™ PAGE预制胶的该部位是平的，使其兼容几乎所有厂家的小型胶电泳槽，所以电泳时须将具有突起结构的硅橡胶密封条(左图)取出后反过来安装(右图)，使其没有突起的平滑面朝外，从而防止漏液。

由于碧云天的BeyoGel™ PAGE预制胶比Life公司的XCell SureLock® Mini-Cell电泳槽配套的NuPAGE® Gel或Novex® Mini Gel略薄，所以需加特制挡板配合使用。如有需要，请在订购本产品时告知，碧云天会免费赠送该特制挡板。

电泳结束后可使用Tris-Glycine缓冲系统的转膜液进行转膜。乙醇或甲醇会使大分子蛋白很容易沉淀。可通过减少转膜液中的乙醇或甲醇百分比(至5%)来避免这种情况发生。为了进一步确保蛋白质不会沉淀，可添加SDS至终浓度为0.1%。SDS向蛋白添加均匀的负电荷，使得它们更容易从凝胶转移到膜上。

转膜时，推荐使用0.45μm的PVDF膜(FFP19/FFP20/FFP22)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。