碧云天研发的BeyoChIP™ Enzymatic ChIP Assay Kit (Protein A/G磁珠)，即BeyoChIP™ Enzymatic Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) Assay Kit with Protein A/G Magnetic Beads，也称BeyoChIP™酶解法染色质免疫沉淀检测试剂盒或BeyoChIP™酶解法ChIP检测试剂盒(蛋白A/G磁珠)，是一种使用微球菌核酸酶(Micrococcal nuclease, MNase)酶解替代传统的超声法进行染色质的片段化(Chromatin fragmentation)，随后用于通过免疫沉淀来沉淀和目标蛋白结合的染色质片段，最后通过PCR、高通量测序或Southern等方法来检测沉淀的染色质片段的试剂盒。本试剂盒通常用于检测特定的转录因子或组蛋白等基因组DNA结合蛋白是否和预期的特定基因组DNA序列在同一复合物中[1-2]。

通过ChIP检测可以获得在体的(In vivo)目标蛋白和预期基因组DNA片段是否在同一复合物中的结论。EMSA，也称gel shift，获得的结果是体外的(In vitro)目标蛋白和预期基因组DNA片段的结合结果，可以推断细胞内也发生类似的结合，但并不代表该情况在细胞内也真实发生。而ChIP的检测结果则可明确说明这种结合在细胞内是真实发生的[1-2]。

本试剂盒采用微球菌核酸酶(Micrococcal nuclease, MNase)进行染色质的片段化(Chromatin fragmentation)。微球菌核酸酶来源于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，是一种非特异性的单链或双链DNA及RNA核酸内切酶，特别是只酶解核小体连接区的DNA，而核小体上的DNA被组蛋白保护而不被降解，因此被应用于染色质片段化。常规的染色质片段化一般是使用超声将染色质打断成几百个碱基对长的片段，而微球菌核酸酶法可将绝大多数DNA片段化至1-5个核小体长度，比超声法更精准、更均一，片段化条件更易优化，而且处理条件温和，对DNA以及DNA与蛋白结合的损伤更小，蛋白不易发生变性，后续免疫沉淀的效果更好、实验重复性更佳[3]。本试剂盒与国际知名C品牌同类试剂盒中的MNase对染色质片段化的效果对比参见图1。由图1可知，本试剂盒中的MNase与C品牌的MNase效果基本一致。

图1. 使用碧云天的BeyoChIP™ Enzymatic ChIP Assay Kit (Protein A/G磁珠) (P2083)中的MNase获得的片段化HeLa细胞染色质DNA电泳效果图。每个样品400万HeLa细胞，参考本试剂盒实验步骤，使用2000 gel units的MNase处理时，大多数染色质DNA被片段化为1-5个核小体(约150-900bp)长度。实际效果会因具体实验条件的不同而存在差异，图中效果仅供参考。M: DNA marker，U: gel units。

本试剂盒采用了Protein A/G磁珠(Protein A/G Magnetic Beads)，比Protein A磁珠或Protein G磁珠适合于免疫沉淀更多种类的抗体，包括mouse IgG₁, IgG_2a, IgG_2b, IgG₃, IgA, rat IgG₁, IgG_2a, IgG_2b, IgG_2c, rabbit IgG, rabbit and goat polyclonal Abs，以及human IgG₁, IgG₂, IgG₃和IgG₄。而且磁珠法比琼脂糖法更方便、快捷、有效。常规的琼脂糖法需要长时间离心，而磁珠法无需离心，只需要短时间磁性分离即可很好的分离，避免了因为离心对免疫复合物造成的机械力影响，充分保证了免疫复合物的活性。

本试剂盒中经过Salmon Sperm DNA预饱和的Protein A/G磁珠和目的基因组DNA的非特异性结合大大下降。

本试剂盒提供了预混合的对照引物(Control Primers)，可用于扩增Human GAPDH的部分相应序列，引物序列为：5'-TACTAGCGGTTTTACGGGCG-3'；5'-TCGAACAGGAGGAGCAGAGAGCGA-3'。

本试剂盒如果用于常规的染色质免疫沉淀，共可以免疫沉淀22个样品。

-20℃保存，一年有效。除MNase (2000 gel units/µl)和Control Primers外均可4℃保存，一年有效。

初次使用本试剂盒时，建议先参考使用说明，对于MNase处理效果进行优化和确认，然后再进行正式的实验。

进行MNase处理条件优化的时候，优先推荐按照说明书推荐条件进行，但也可以使用6孔板进行操作，试剂的用量可以参考说明书中10cm培养皿的用量按照比例减小用量即可。如果需要更多的MNase，也可以单独从碧云天订购微球菌核酸酶(Micrococcal Nuclease, MNase) (D7201)。

每个样品MNase处理后，推荐参考使用说明对于基因组DNA片段化的效果进行电泳确认。

需自备的主要试剂和耗材：用于ChIP的一抗，37%甲醛，PBS (C0221A)，蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X) (P1010/P1011)、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X) (P1050/P1051)或PMSF (ST506/ST507)，Elutioin Buffer (1% SDS, 0.1M NaHCO₃)，蛋白酶K (ST532/ST533)，Glycogen (DNase, RNase & Protease free) (D0816)或Glycogen (核酸沉淀用) (D0812)，Tris平衡苯酚，氯仿，无水乙醇，95%乙醇，70%乙醇，3M NaAc (pH5.2) (ST351)，0.5M DTT (ST041)以及细胞刮(FSCP023/FSCP029)或细胞铲(FLFT021)，磁力架(FMS004/FMS008/FMS016/FMS024)。

需自备超声样品处理仪(Sonicator)，也称超声粉碎机或超声细胞粉碎机。

使用有振荡功能的金属浴进行65℃孵育，效果更佳。

使用甲醛时请在通风橱中进行操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。